最小紅斑性用量アッセイ:マウスモデルにおけるUV感度の測定方法

要約

出典:Amaro-Ortiz, A. et al. ヒト化マウスモデルにおける表皮メラニンの薬理学的誘導と日焼けに対する保護。J. Vis. Exp.(2013年)

このビデオでは、ヒト化マウスモデル(人間の皮膚を模倣したマウスモデル)でUV感度を測定する方法を説明しています。皮膚に紅斑や浮腫を引き起こす可能性のある紫外線の最小紅斑線量(MED)を決定します。この方法は、UV感受性を低下させるために使用される薬物の有効性を見つけるのに役立ちます。

プロトコル

動物が関わるすべての手続きは、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

「最小紅斑性用量」(MED)の計算による紫外線感度の決定

1. 車両またはフォルスコリンのいずれかで前処理された動物を使用してください。ケタミンとキシラジンの標準的な混合物の腹腔内注射で動物を麻酔します。.
2. MEDテスト用のUV閉塞テープを準備します。テープに穴を開けるには、1 cm² の円形の切り欠きがある頑丈な穴あけパンチを使用します (図 1A および B)。テープに定義されたサイズの穴と対称的な配置があることで、照射後の皮膚の変化の認識が容易になります。テープの各穴に、小さいながらも簡単に取り外し可能なテープを貼り付け、UV曝露中に定義された時間に取り外すことができ、さまざまなUV線量を投与できるようにします。
3. 動物が十分に鎮静されたら、テープを背側の表面に置きます。目の潤滑剤は常に麻酔下で使用する必要があります。
4. ピーク出力が313 nm、範囲が280〜370 nmの2つのWestinghouse F15T8UV-Bランプで構成されるUVソースをオンにします。ランプを、UVBセンサーを備えたUV光度計で測定された一定のUV出力に平衡化させます(通常、ランプがウォームアップするまでに数分かかります)。
5. UV光度計で測定したUV透過率に基づいて、各所望の線量に対するUV露光時間を計算します。たとえば、ランプのUVB出力は2.4 mW / cm²です。したがって、5 kJ/m² を投与するには、皮膚を 208 秒 (3 分 28 秒) の UVB 放射線にさらす必要があります。これは、以下で計算されます
   
6. 鎮静剤を投与した動物(それぞれ閉塞テープが貼られています)の腹面を下にして、UVに均一にさらされるようにします。選択した線量の紫外線を投与するには、穴を覆っている小さな閉塞テープを順番に剥がして、皮膚の^1cm2領域を正しい線量の放射線にさらします。したがって、上記の例を使用すると、実験で40 kJ/m²が最大線量である場合、動物は合計27分と47秒間ランプの下にあり、40 kJ / m²の条件の皮膚には、その間ずっと上層テープがありません。ただし、5 kJ/m²の状態を覆うテープは、露光が208秒残っているときに除去されます。テープの取り外しのタイミングは、各条件が同時に終了するようにする必要があります。
7. 紫外線を浴びた後は、急な動きや無理な動きで皮膚が破れないように注意しながら、背側の皮膚からテープをはがしてください。麻酔からの回復を可能にするために、動物を暖かく静かな場所に置きます。
8. マウスを24〜48時間モニターして、特定の用量のUV照射に曝露された解剖学的部位に対応する紅斑(発赤)または浮腫(腫脹)の目立たない領域を探します。皮膚の所見を写真で記録します。
9. MED値は、露出した皮膚の輪全体の紅斑および/または浮腫によって定義される炎症を引き起こすUVの最小線量に対応します。皮膚の色素沈着はMEDの決定に困難を及ぼす可能性があることに注意してくださいが、紅斑と浮腫は、UV曝露中のテープの開口部の定義された形状のおかげで、一般的に正確に評価できます。

結果

図 1.フォルスコリン誘発性メラニン化は、最小限の紅斑性用量(MED)試験によって決定されるように、UV媒介性炎症から保護します。.(A,B) ビヒクルまたはフォルスコリンのいずれかで 1 日 2 回 5 日間 (A、C) または 1 日 1 回 15 日間 (B、D、E) 治療した動物の UV 閉塞テープと UVB 用量の位置。最後の局所治療は、照射の48時間前に適用されました。背側の皮膚は、1 cm2 の円形の開口部が打ち抜かれた UV 閉塞性テープを使用し、適切な線量を得るためにさまざまな露光時間を使用して、さまざまな用量の UVB に曝露されました。照射後、一部の実験では、露出した皮膚の円をペンで標識しました。特定の用量に曝露された皮膚の輪全体の紅斑および/または浮腫によって定義される MED は、曝露の 48 時間後に...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
キシラジン	アナセド注射	LA04612	シェナンドー、アイオワ州、米国
ケタミンHCl、USP	パットニー	NDCの26637-411-01	セントジョセフ、ミズーリ州、米国
エタノール	デコンラボ。	2705
脱毛クリーム、ナイール	チャーチ・ドワイト	JF-11 4381322	ニュージャージー州プライストン
殺菌HgランプUV-B	ウェスティングハウス	F15T8UV-B
放射計光度計	国際光	1LT400Aの	米国マサチューセッツ州ピーボディ
アイソセシア、イソフルラン、USP	バトラー・シャイン	NCDの11695-6776-1	米国オハイオ州ダブリン
クロマメーター	コニカミノルタ	CR-400	ラムゼイ、ニュージャージー州、米国
クロマメーターCR-400用データプロセッサ	コニカミノルタ	DR-400	ラムゼイ、ニュージャージー州、米国

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