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慢性再発性EAEの誘導とモニタリング
エマルジョンは、補足完全フロイントアジュバントに添加水溶液中の抗原の1:1混合物である。それは、アジュバントとしない他の方法でラウンドして抗原を追加することが非常に重要です！
作り、エマルジョンを注入する際に廃棄物がたくさんある。常に必要なものよりも1.5〜2倍以上を準備。
オートクレーブ乳鉢、乳棒、ガラスの注射器、およびブリッジを使用してください。すべてのプラスチックは無菌でなければなりません。準備は、通常の実験台で行うことができます 。
1。補足アジュバントの調製
乳鉢に結核菌 （Difco社のカタログ＃231141）と場所の30 mgを秤量する。細菌を破ることを避けるためあまりにもハードキーを押すことなく、薄い粉末にしてください。完全フロイントアジュバントH37Ra（Difco社製カタログ＃231131）とミックスの10 mlを追加します。この補足アジュバントは現在、4 mg / mlの結核菌が含まれています。チューブに移す。
2。脊髄ホモジネートの調製
DAラット（年齢/性別無関心）から脊髄を収集し、-80凍結℃で保存補足アジュバントを1:1（容積重量）を混在させるのに十分持っている冷凍脊髄を量る。カミソリの刃を持つできるだけ細かいとして脊髄をミンチ、セクション1で使用したモルタルに転送、および乳棒を用いてペーストを作る。
3。エマルションの調製
- 場所は、チューブのフロイントアジュバントを完了補った。ハイスピードでボルテックス。ボルテックスしながらドロップで脊髄ホモジネートドロップを追加。さらに5分間脊髄ホモジネートのすべてが追加され、渦。混合物は薄いピンクを有効にしてください。
- 5 mlのガラス製の注射器でエマルジョンを入れ、（フィッシャーのカタログ＃14から825 - 17L）18Gのブリッジを使用して別の5mlのガラス製注射器にリンクします。それがハードになる（5〜10分）まで、シリンジから他にエマルジョンを送る。エマルジョンのより5mlを準備している場合、いくつかの5mlの注射器が大きい注射器は使用しないでください使用。
- エマルジョンは3週間は4℃で注射器に格納することができます。私はそれが崩壊しないことをチェックするため、事前にそれを少なくとも12時間の準備をお勧めします。それは厚さ2段階に分離されていないままにしてください。色は黄色またはベージュの光に一晩変更されます。
4。ラットの予防接種
- 数分間シリンジでエマルジョンを混合し、注射用注射器に移す。短期的な麻酔の下に23G注射針および3mLルアーロックシリンジを用いて尾の非常ベースで皮下に200μlを注入する。
- 受信者は、7〜9週齢の雌性DAラットです。我々は、ハーラン - スプラーグドーリーから我々のラットを得る。
- ラットを毎日二度見して毎日検討する必要があります。臨床徴候は7-15日エマルジョンの注入後に期待されています。
臨床スコア：
0：無症
0.5：遠位足を引きずる尾
1：足を引きずる尾
2：軽度の不全対麻痺、運動失調
3：中等度の対麻痺、時々ラット旅行
3.5：ある後肢が麻痺され、その他の動き
4：完全な後肢の麻痺
5：完全な後肢の麻痺や失禁
6：瀕死状態、呼吸困難、飲食していません。すぐに安楽死させる。