ショウジョウバエにおける感染伝播の可能性を評価するための細菌脱出の定量化

要約

出典: Siva-Jothy, J. A. ら、 ショ ウジョウバエメラノガスターにおける口腔内細菌感染と脱毛。 J. Vis. Exp.(2018年)

この動画では、感染したハエを複数の餌入り管に移し、脱落した細菌を回収し、連続希釈とプレートによる生存可能な菌群を定量することで、ショ ウジョウバエ の細菌脱落を監視する手順を実演しています。

プロトコル

1. 細菌の脱出を測定する
   1. 内部負荷と並行して剥落量を測定してください。
   2. 感染後、単一フライを1.5mLのマイクロ遠心分離チューブに移し、約50μLのルイス培地を24時間投与します。
   3. 内部負荷測定のためにフライを除去し、100μLの1xリン酸塩緩衝生理食塩水で3秒の激しい渦巻きでチューブを洗浄します。
   4. この洗浄液のCFU(コロニー形成単位)をLB(ルリア・ベルタニ)栄養素寒天にプレートして測定します。
   5. 感染後、単一フライを1.5mLのマイクロ遠心分離チューブに移し、約50μLのルイス培地を24時間投与します。
   6. フライを新しいマイクロ遠心分離管に移し、さらに約50μLのルイス培地を24時間投与します。汚染されたチューブは100μLの1倍PBSで3秒間強く渦を吹き込み洗浄します。
   7. この洗浄液のCFUをLB栄養用天にプレートして測定してください。

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材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
バイアル	サーステッド社	58.49	発泡スチロールフラットベースチューブ 75mm x 23.5mm、23ml
寒天	シグマ・オルドリッチ	A7002	寒天、アッシュ 2.0-4.5%
ブラウンシュガー	ビッドベスト	66032	薄茶色のソフトシュガー
トウモロコシ	ダヴズファーム		有機トウモロコシ粉
フェルミパン酵母	ビッドベスト	96360	乾燥した即効酵母
ペトリ皿	フィッシャー・サイエンティフィックUK Ltd.	15788517	X600ペトリ皿 90 X 16.2MM 無菌トリプルベント
エッペンドルフチューブ(1.5ml)	サーステッド社	72.690.001	サーステッド マイクロチューブ 円錐形ベースプッシュキャップ 1.5ml スタンダードニュートラル
エタノール	VWRインターナショナル株式会社	20821.33	エタノール絶対アナラー NP ACS/R.PE - 分析等級
LBブロス、ミラー	フィッシャー・サイエンティフィックUK Ltd.	BP1426	トリプトン10g、酵母エキス5g、塩化ナトリウム10g/リットル含まれています
96ウェルマイクロプレート	サイエンティフィック・ラボラトリー・サプライズ株式会社	353072	Falcon 96 ウェルクリアフラットボトムTC処理ポリスチレン細胞培養マイクロプレート(蓋無菌付き)
渦	フィッシャーブランド		Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V
10 μLピペットチップ	グライナー・バイオワン社	741015	ギルソン風に。グラデーション済み、クリア済み、再充填、960pc
200 μLピペットチップ	グライナー・バイオワン社	741065	ギルソン風に。グラデーション済み、クリア済み、再充填、960pc
1000 μL ピペットチップ	グライナー・バイオワン社	741045	ギルソン風に。グラデーション済み、クリア済み、再充填、960pc
20μL ろ過ピペットチップ	グライナー・バイオワン社	774288	フィルターチップはギルソンスタイルで。クリア、ラックブルー、シングルパック、R/Dnaseフリー、96個入り10ラック
200 μL ろ過ピペットチップ	グライナー・バイオワン社	739288	フィルターチップはギルソンスタイルで。クリア、ラックブルー、シングルパック、R/Dnaseフリー、96個入り10ラック
1000μL ろ過ピペットチップ	グライナー・バイオワン社	740288	フィルターチップはギルソンスタイルで。クリア、ロックブルー、シングルパック、R/Dnaseフリー、60個入り10個のラック