慢性緑膿菌皮膚創傷感染のマウスモデル開発

要約

出典: デ・フリース、C. R.、 et.al。慢性 緑膿菌 創傷感染の遅延接種モデル。 J. Vis. Exp. (2020年)

この動画は、透明なフィルムドレッシングで覆われた全層の背側皮膚創を持つマウスに発光性プ セウドモナス・エルギノーサ の遅延接種を実演しています。これによりバイオフィルムの形成と慢性感染の確立が促進されます。定期的な生物発光モニタリングにより、細菌負荷の定量化と感染進行の追跡が可能になります。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)への接種

1. PAO1:lux培養液を100 μg/mLカルベニシリンを含む75 mLの溶原ブロス(LB)培地でOD₆₀₀ = 0.05に希釈し、培養が初期指数関数的段階(OD₆₀₀≈0.3)になるまで培養します。これには約2〜3時間かかるはずです。
2. PAO1:luxをリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)に希釈し、濃度(7.5 ± 2.5)×10² CFU/mLにします。実験後に十分な量を確保し、プレート付けのために余分な接種量を用意してください。施設間輸送の場合は、バイオハザードと明確に記された漏れ防止箱に二重封じ込めを用いてください。
3. P . aeruginosa およびマウスの作業は、動物バイオセーフティレベル2(ABSL-2)承認された生物安全キャビネット(BSC)内で、承認された個人用保護具を使用して実施してください。体重計のような再利用可能な機器は、汚染を防ぐためにラップで覆うべきです。
4. マウスに3%イソフルランを使った麻酔を施します。マウスの重さを測って、その重さを記録してください。マウスに事前に温めた無菌0.9%塩化ナトリウムを両側に250μL、合計500μLを皮下注射します。
5. もしネズミの透明なフィルムドレッシングが一晩で剥がれていれば、できたかさぶたを慎重に取り除き、新しいドレッシングを塗り替えてください。
6. 500μLのツベルクリン27G安全キャップシリンジを使い、PAO1:lux懸濁液を透明なフィルムドレッシングを通して各創傷に40μL注入します。非接種/PBS創傷制御には、対側からの交差汚染を防ぐために異なるマウスを使用するべきです。
7. マウスをケージに戻し、温熱パッドの上に置いて目覚めるまで監視します。すべてのマウスは交差汚染を防ぐために個別にケージに入れて飼育してください。
8. ケージの床にフードペレットの間に挟んで高カロリーの栄養補助ペーストを用意してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.9%塩化ナトリウム注入	ホスピラ	2484457
C57BL/6Jオスマウス	ジャクソン研究所	664
リン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)1回	コーニング	21-040-CV
プレス&シールラップ	よかった	該当なし
セーフティグライドインスリンシリンジ、1/2mL、30G x 5/16 TW	BD	305934
スケール	オハウス・スカウト・プロ	SP202
補足栄養補助	ヘンリー・シャイン動物保健	29908