方法論記事

植物RNAサイレンシングを抑制する病原体エフェクターのスクリーニングのための共浸透アッセイ

2026年1月30日

この記事について

要約

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出典: Shi, J., か植物病原体の分泌効果子からRNAサイレンシング抑制因子のスクリーニングおよび同定。 J. Vis. Exp. (2020年)

このビデオでは、 Nicotiana benthamiana 16cにおけるRNAサイレンシングを抑制する病原体エフェクタータンパク質を特定する共浸透アッセイを示しています。蛍光リポーターと候補エフェクター遺伝子が アグロバクテリウム を介して植物の葉に届けられます。通常、RNAサイレンシングはレポーターの転写物を分解し、蛍光を減少させます。抑制エフェクターはこの応答を遮断し、蛍光を保持します。このアッセイは、宿主防御を妨げる微生物エフェクターを迅速かつ視覚的にスクリーニングする方法を提供します。

プロトコル

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共浸透 Nicotiana benthamiana 葉

  1. 35S-GFPを含む アグロバクテリウム 培養液と、35S-キュウリモザイクウイルス抑制体2b(CMV2b)、推定効果子、または空ベクター(EV)を含むア グロバクテリウム 培養液を等量混合します。
  2. N . benthamiana 16cの葉の背面側にある混合アグロバクテリウム懸液を、1mLの針なし注射器で慎重にゆっくり浸透させます。
  3. 葉に残った細菌の懸浮液を軟部組織ワイパーで取り除き、浸潤した斑点の縁をメイカーペンで円を描きます。
  4. 浸透した植物は同じ成長条件のまま成長室に残します。

    注: 安全と健康の観点から、浸透時には保護用のアイゴーグルとマスクを着用してください。交差汚染を防ぐために、浸透の間に手袋を交換またはエタノールで滅菌する必要があります。通常、浸透には葉1枚あたり少なくとも1mLのアグロバクテリウム懸濁液が必要です。全身性沈黙には浸透のために少なくとも2枚の葉が必要です。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
UVランプアナリティク・イェナUVP B-100AP観察

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タグ

RNA GFP Nicotiana benthamiana siRNA RISC

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