細菌外多糖分解を評価する薄層クロマトグラフィーの実施

この記事について

要約

このビデオでは、薄層クロマトグラフィー(TLC)を用いてヒトの糞便微生物叢による外胞多糖(EPS)の分解を評価する方法を示しています。発酵上清液中のEPS断片はTLCを用いてサイズと極性に基づいて分離され、炭水化物特異的染色後に色付きの帯として可視化されます。

プロトコル

1. ヒトの糞便微生物群による外胞多糖(EPS)分解

発酵した上清液0.2μLを、あらかじめコーティングされたシリカゲル-60薄層クロマトグラフィー(TLC)アルミニウムプレートに装填し、ヘアドライヤーで乾燥させます。
プレートを20mLの蟻酸/n-ブタノール/水(6:4:1、v:v:v)溶液で現像し、ヘアドライヤーで乾燥させます。
プレートをオルシノール試薬に浸して染め、その後ヘアドライヤーで乾かします。
1. オルシノール試薬を、リケノール900mgを蒸留水25 mLに溶かし、その後エタノール375 mLを加えて調製します。そのため、濃硫酸をゆっくり加え、溶液を十分に混ぜる必要があります。
ベーキングオーブンで120°Cの加熱板を3分間加熱し、TLCバンドを測定してEPSの劣化を評価します。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号	コメント
ベーキングオーブン	上海一衡科学機器有限公司	DHG-9240A	加熱して焼くために使う
エタノール	シグマ・オルドリッチ	E7023	ビタミンK1の調製に使用
蟻酸	シグマ・オルドリッチ	399388	TLCに使われる
リケノール	ソーラービオ	C8380	カラープレートの準備に使用
n-ブタノール	ケムスパイダー	71-36-3	TLCに使われる
オルシノール	シグマ・オルドリッチ	447420	オルシノール試薬の調製に使用されます
硫酸	シグマ・オルドリッチ	150692	オルシノール試薬の調製に使用されます
TLCアルミニウムシート	メルク・ミリポア	116835	TLCに使われる

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