細菌外多糖分解を評価する薄層クロマトグラフィーの実施

要約

出典: Hu, Y. ら。In vitro bath 発酵システムを用いてエンドバイオティクスとヒト腸内細菌叢の相互作用の解析。 J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオでは、薄層クロマトグラフィー(TLC)を用いてヒトの糞便微生物叢による外胞多糖(EPS)の分解を評価する方法を示しています。発酵上清液中のEPS断片はTLCを用いてサイズと極性に基づいて分離され、炭水化物特異的染色後に色付きの帯として可視化されます。

プロトコル

1. ヒトの糞便微生物群による外胞多糖(EPS)分解

1. 発酵した上清液0.2μLを、あらかじめコーティングされたシリカゲル-60薄層クロマトグラフィー(TLC)アルミニウムプレートに装填し、ヘアドライヤーで乾燥させます。
2. プレートを20mLの蟻酸/n-ブタノール/水(6:4:1、v:v:v)溶液で現像し、ヘアドライヤーで乾燥させます。
3. プレートをオルシノール試薬に浸して染め、その後ヘアドライヤーで乾かします。
   1. オルシノール試薬を、リケノール900mgを蒸留水25 mLに溶かし、その後エタノール375 mLを加えて調製します。そのため、濃硫酸をゆっくり加え、溶液を十分に混ぜる必要があります。
4. ベーキングオーブンで120°Cの加熱板を3分間加熱し、TLCバンドを測定してEPSの劣化を評価します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ベーキングオーブン	上海一衡科学機器有限公司	DHG-9240A	加熱して焼くために使う
エタノール	シグマ・オルドリッチ	E7023	ビタミンK1の調製に使用
蟻酸	シグマ・オルドリッチ	399388	TLCに使われる
リケノール	ソーラービオ	C8380	カラープレートの準備に使用
n-ブタノール	ケムスパイダー	71-36-3	TLCに使われる
オルシノール	シグマ・オルドリッチ	447420	オルシノール試薬の調製に使用されます
硫酸	シグマ・オルドリッチ	150692	オルシノール試薬の調製に使用されます
TLCアルミニウムシート	メルク・ミリポア	116835	TLCに使われる