ヒト腸内微生物の外核多糖活性の調査

要約

出典: Hu, Y. et.al., In vitro bath 発酵システムを用いたエンドバイオティクスとヒト腸内細菌叢の相互作用の解析。 J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオは、外多糖に反応したヒト腸内細菌叢による短鎖脂肪酸産生の解析を示しています。これはガスクロマトグラフィーを用いた微生物発酵生成物の分離と定量化を強調しています。その結果、外多糖は腸内の宿主-病原体の動態に影響を与える微生物代謝物を調節することが明らかになりました。

プロトコル

1. ヒト腸内細菌叢による短鎖脂肪酸(SCFA)産生に対する外多糖(EPS)の影響
   1. ステップ5.3から2 mLの遠心分離チューブで調製した発酵上清液(1 mL)を加えます。
   2. 各試料に25%(w/v)メタリン酸を0.2mL加え、ボルテックスで溶液を十分に混ぜます。
   3. 混合物を13,000 x gで20分間遠心分離し、上清液を新しいチューブに移します。
   4. 同時に、120 mMの酢酸、プロピオン酸、酪酸、異酪酸、イソ酪酸、バレリック酸、イソバレリック酸の溶液を準備します。次に、各調製酸を1 mL、25%(w/v)メタリン酸1.2 mLに加え、標準的なカクテルとして使用します。
   5. 0.22μMの膜を使って試料をろ過します。
   6. 高性能ガスクロマトグラフィーを用いてSCFA濃度を検出します。
      注: ガスクロマトグラフィー(GC)にはInertCap FFAPカラム(0.25 mM x 30 m x 0.25 μM)が使用されます。SCFA濃度は、GC Solutionソフトウェアパッケージ内の単点内部標準法を用いてピーク面積に基づいて定量化されます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.22μm膜フィルター	ミリポール	SLGP033RB	サンプルのフィルタリングに使用
0.4mmふるい	サーモ・フィッシャー	308080-99-1	人間の糞便サンプルの製備に使用
酢酸	シグマ・オルドリッチ	71251	SCFAの標準サンプル
ブチリック	シグマ・オルドリッチ	19215	SCFAの標準サンプル
毛細柱	島津GL	不活性キャップFFAP(0.25 mm × 30 m × 0.25 μm)	SCFA検出に使用
ガスクロマトグラフィー	島津商社	GC-2010プラス	SCFA検出に使用
イソバイチン酸	シグマ・オルドリッチ	46935-U	SCFAの標準サンプル
イソバレル酸	シグマ・オルドリッチ	129542	SCFAの標準サンプル
メタリン酸	シグマ・オルドリッチ	B7350	SCFAの標準サンプル
ナオ	シグマ・オルドリッチ	30620	バッファーのpH調整に使われる基本溶液
プロピオン系	シグマ・オルドリッチ	94425	SCFAの標準サンプル
ヴァレリック	シグマ・オルドリッチ	75054	SCFAの標準サンプル