慢性腸感染症のマウスモデルにおける組織細菌負荷の定量化

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Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

出典: Lo, B. C. ほか慢性サルモネラ感染による腸線維症。 J. Vis. Exp. (2019年)

この動画は、ストレプトマイシン耐性サルモネラ・チフィムリウムによる慢性感染のマウスモデルにおける細菌負荷の定量化を示しています。安楽死および無菌解離の後、盲腸および脾臓組織を採取し、鋼製ビーズで均質化して細菌を放出し、連続的に希釈されます。希釈液は選択的寒天にプレートされ、目視可能なコロニー数を数えて腸および全身部位の組織あたりの細菌負荷を推定します。

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスの口腔ガベジ用サルモネラ・チフィムリウムΔAroA培養の調製

S. Typhimurium ΔAroAの凍結グリセロールストックから、100 μg/mLのストレプトマイシンを含むLuria-Bertani寒天(LB寒天)を用いてストリークプレートを作成し、無菌接種ループを設置します。37°Cで一晩培養します。ストリークプレートは4°Cで最大1週間保存可能です。
感染の前日に、2.5mLの水に溶かして0.5gのストレプトマイシンを準備します。ストレプトマイシン溶液をろ過滅菌した後、バルブチップ付きの22Gガベージ針と1 mLの注射器、100 μLのストレプトマイシン溶液(1回あたり20 mg ストレプトマイシン)を使ってマウスを経口ガベージします。接種ループを用いて、1コロニーの培養管にLBブロス3mL(50 μg/mLストレプトマイシン)を接種します。37°Cで200回転毎分(RPM)で振動しながら、一晩好気培養を行ってください。
感染当日には、無菌リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で2回連続して1/10希釈した サルモネラ 菌培養を行い、最終感染用投与を準備します。これにより、約3×106コロニー形成ユニット(CFU)を含む100....

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Materials

List of materials used in this article

Name

Company

Catalog Number

Comments

2mlの丸底安全ロックチューブ

エッペンドルフ

22363344

ステンレス製ビーズ

キアゲン

69989

PBS

ギブコ

10010031

大型オリフィスピペットの先端

フィッシャー

2707134

2 mLメガブロックプレート

サーステット

82.1972.002

ガベージ針

FST

18061-22

ストレプトマイシン硫酸塩

シグマ

S9137

ミキサーミル

レッチ

うん

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