出典:オブライエン、V.P.らマウスにおけるガードネレラ膣膀胱曝露による再発性大腸菌尿路感染症。J. Vis. Exp.(2020)
このビデオは、再発性尿路感染症のマウスモデルを確立するために Gardnerella vaginalis 接種点の調製方法を示しています。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
方法論記事
マウスの再発性尿路感染症モデル化のための Gardnerella vaginalis 接種薬の製剤
202 回視聴
⸱
2026年3月31日
この記事について
要約
プロトコル
- ガードネレラ・ヴァギナリス接種薬を準備してください
注: すべてのステップは嫌気性チャンバー内で行われます。理想的な培養培養時間はG . vaginalisの株によって異なり、株によっては定止期に入り、他よりも早く死に至ることもあります。したがって、マウスでの実験を行う前に、特定の株の培養時間を経験的に決定すべきです。このモデルで他のまたはすべてのG . vaginalis 株が同じ効果を引き起こすかは不明です。 - -80°Cの冷凍ストックからNYCIIIプレート(抗生物質なし)にストリークG . vaginalis 株をストライクします。プレートを37°Cで嫌気性で24時間培養します。
- 嫌気性チャンバーで、嫌気性NYCIII培地5mLを、NYCIIIプレートから1μLループの細胞(単一コロニーでは不十分)と接種し、37°Cで嫌気条件下で18時間静的培養します。培養培地に抗生物質は入れないでください。
- 分光光度計を用いて培養物のOD600 を測定します
- 培養液の定体積(X)を9600 × gで1分間遠心分離し、培地を吸引します。以下の式を用いて、ペレットを再懸浮させるためのリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)の体積(Y)を計算し、50 μLで10⁸コロニー形成単位(CFU)を達成するための望ましい接種量(OD)を得ます。以下の式を用いて。X mL × ODculture(ODculture)= Y mL×OD接種量、YY = (X ml ×ODculture) / OD接種量を解きます
注: JCP8151BSmRのOD接種量は5ですが、他のG. vaginalis株については経験的に測定する必要があります。例えば、ODculture=2.0の状態でJCP8151BSmR液体培養液3 mLを一晩回転する場合、Y=(3 mL × 2.0) / 5.0;したがって、ペレットを1.2 mL PBSで再懸濁します。 - 細菌ペレットをPBSに所定の濃度まで再懸浮させます。接種を連続的に希釈・プレートすることで、各実験で実際に使用された接種量を決定します。単に外側値だけに頼らないでください。
- 培養液の定体積(X)を9600 × gで1分間遠心分離し、培地を吸引します。以下の式を用いて、ペレットを再懸浮させるためのリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)の体積(Y)を計算し、50 μLで10⁸コロニー形成単位(CFU)を達成するための望ましい接種量(OD)を得ます。以下の式を用いて。X mL × ODculture(ODculture)= Y mL×OD接種量、YY = (X ml ×ODculture) / OD接種量を解きます
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| グルコース | シグマ | G7528 | NYCIII G . vaginalis 増殖培地について |
| 4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジネエスルホン酸(HEPES) | セルグロ | 25-060-CL | NYCIII G . vaginalis 増殖培地について |
| 塩化ナトリウム | シグマ | S3014 | NYCIII G . vaginalis 増殖培地について |
| プロテオスペプトン#3 | フィッシャー | DF-122-17-4 | NYCIII G . vaginalis 増殖培地について |
| 酵母抽出物 | フィッシャー | DF0127-17-9 | NYCIII G . vaginalis 増殖培地について |
| 分光光度計 | バイオクロム | 80-3000-45 | 細菌のOD600測定 |
| ストレプトマイシン | ギブコ | 11860038 | G. vaginalis NYCIII選択プレート(1 mg/mL)に追加 |
タグ
