ウイルス共感染後の 肺炎連鎖球菌 の病原性移行を研究するためのマウスモデル

要約

出典: Lenhard, A. ほか。 ウイルス共感染による肺炎連鎖 球 菌の感染者から病原体への移行をマウスモデルで示すものは、加齢による悪化疾患を再現しています。 J. Vis. Exp. (2022年)

この動画は、インフルエンザウイルスが 肺炎球菌 を定植株から病原体へと移行させるマウス共感染モデルを示しています。細菌の定着、ウイルス感染、疾患進行に関わる段階を概説しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスに対してバイオフィルム培養された肺炎連鎖球菌(S. pneumoniae)への鼻腔内接種

1. マウスを購入して、希望する年齢で使いましょう。
   注: 3〜4ヶ月のマウスが若い宿主のモデルに好まれ、21〜24ヶ月のマウスは65歳>高齢者のモデルにも使われます。ここで示すデータはC57BL/6オスマウスからのものです。
2. バイオフィルムで培養したバクテリアアリコートを氷で解凍し、1,700 g で5分間×回転させます。ペレットを破損させないように上清液を慎重に取り除き捨て、細菌を洗浄するために1 mLのリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)に再懸浮させ、1,700 × g で5分間再度回転させます。上澄液を除去し、ペレットを所望濃度に必要な量で再懸濁します(鼻腔接種時は5 × 10⁶ コロニー形成単位(CFU)/10 μLを目標)。血液寒天プレートに接種剤をプレートして投与した細菌量を確認します。
3. マウスに5×10⁶ CFUをそれぞれのナリスにピペッティングして5 10 6 CFUを鼻腔内に接種します。マウスをしっかりと持って頭部を安定させ、吸い込むまで(通常はピペットで体をネアに移して数秒以内に)してください。この工程は麻酔なしで行われ、接種器の肺誤嚥を防ぎます。

2. インフルエンザAウイルス(IAV)によるウイルス感染

1. 鼻腔内予防接種から48時間後に、氷上で関心のあるIAV株を解凍します。
   注: ここで示したデータは、共同交換 を通じて 得られたマウス適応型インフルエンザAウイルスA株A/PR/8/34 H1N1に関するものです。
2. ウイルスが解凍されたら、PBSで所定の濃度まで希釈します。気管内感染には20 PFU/50 μL、鼻内感染では200 PFU/10 μLを目標にします。モック感染群や細菌のみのグループには、PBSを使ってマウスに接種してください。
3. 麻酔前にマウスの目に眼用潤滑剤を塗布します。マウスには5%イソフルランで麻酔し、しっかりとつまんで麻酔を確認します。
4. 動物が麻酔されたら、イソフルランチャンバーから取り出し、直ちに麻酔マウスに50μL(20 PFU)のIAVを気管内に鈍いピンセットで感染させ、舌を口から引き抜き、液体の量を気管内にピペットで送り込みます。
5. マウスは別のケージに入れて、完全な回復まで様子を見てください(胸骨横位(胸の上で直立して寝られる状態)を維持できます。
6. 回復後、ステップ1.3の接種法を用いて直ちに10μL(200 PFU)のIAVを経鼻で接種します。
7. 同じ感染群で単独または二重の細菌およびウイルス感染を経験し、他の群から分離された家鼠。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
4-アミノベンゾ酸	フィッシャー	AAA1267318	ミックスIストック
100μmフィルター	フィッシャー	07-201-432
BD イントラメディックポリエチレンチューブ	フィッシャー	427410	鼻洗浄用のチューブ
BD使い捨てシリンジ(Luer-Lokチップ付き)(1mL)	フィッシャー	14-823-30
D39	国家タイプ文化コレクション(NCTC)	NCTC 7466	肺炎連鎖球菌株
ピベタール・イソフルラン	パターソン獣医	07-893-8440	感染中の麻酔のためのイソフルラン
サーモサイエンティフィックの血液用寒天とゲンタミシン	フィッシャー	R01227	抗生物質ゲンタミシンを含む血液寒天プレート
TIGR4	ATCC	BAA-334	肺炎連鎖球菌株