出典: フィゲロア, D. ほか 抗菌ペプチドの局在を特徴づけるための細菌スフェロプラストおよびプロトプラストの生成と可視化。 J. Vis. Exp. (2018年)。
このビデオは、桿状グラム陰性菌からスフェロプラストを調製する方法を示しています。細菌は抗生物質の存在下で培養され、細長いフィラメントを形成します。これらは高張溶液で洗浄され、外側細胞壁を除去するために溶解緩衝剤で処理されます。低張性処理はスフェロプラストを形成し、冷えた等張性溶液で安定化し、冷温条件下で保存します。
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方法論記事
グラム陰性菌からの球状体生成
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2026年2月26日
この記事について
要約
プロトコル
1. 溶液の調製
注:大 腸菌 (E. coli) 球体体を作るために、ステップ1.1–1.9に記載された溶液を準備してください
- 10.34 g トリス・HClと4.17 gのトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris·OH)を125 mLの蒸留水(dH₂O)に溶かして、pH 7.8のトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(Tris-Cl)を125 mLフラスコで調製します。25mmのシリンジフィルターに0.2μmの膜を装着して消毒し、円錐形の管内で室温で保存します。
- 溶液A(20 mM塩化マグネシウム(MgCl₂)、0.7 Mスクロース、10 mM Tris-Cl、pH 7.8)を25 mLのdH₂Oに溶かして125 mLフラスコに調製します。500 μL 1 M Tris-Cl(pH 7.8)を加え、体積を50 mLに調整します。25mmのシリンジフィルターに0.2μmの膜を装着して消毒し、円錐形の管内で室温で保存します。
- 溶液B(10 mM MgCl₂、0.8 M ショ糖、10 mM Tris-Cl、pH 7.8)を125 mLフラスコの中で25 mLのdH₂Oに溶かして準備します。500 μL 1 M Tris-Cl(pH 7.8)を加え、体積を50 mLに調整します。25mmのシリンジフィルターに0.2μmの膜を装着して消毒し、円錐形の管内で室温で保存します。
- ショ糖13.69g(....
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結果
図1:大腸菌の代表画像。(A)大腸菌、(B)大腸菌ヘビ、(C)大腸菌球体。画像は100倍倍で撮影されました。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| トリズマ水素化物(トリスHCl) | シグマ | T3253 | |
| トリズマ基地(トリスOH) | シグマ | T1503 | |
| 塩化マグネシウム | シグマ | M8266 | |
| ショ糖 | シグマ | S7903 | |
| リソザイム | シグマ | L6876 | |
| デオキシリボヌクレアーゼI | シグマ | D4527 | |
| エチレンジアミネテトラアセティック酸 | シグマ | 106361 | 元のプロトコル開発ではSigma 106361を使用しました。106361はED2SSを置き換えて廃止されました |
| セファレキシンハイドレート | シグマ | C4895 | |
| BBLトリプチカーゼ大豆ブロス | フィッシャー・サイエンティフィック | B11768 | |
| マレック酸 | シグマ | M0375 | |
| アクロディスク 25mmシリンジフィルター(0.2 μm HT タフリン膜付き) | パル・コーポレーション | 4192 |
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