マウス膣内腔におけるグループB 連鎖球菌 負荷のスワブおよび染色培養による定量化

要約

出典: パトラス、K. A. & ドラン、K. S.グループ B連鎖球菌 膣定着のマウスモデル。 J. Vis. Exp. (2016年)

このビデオは、マウスモデルにおける膣B群 連鎖球菌 (GBS)負荷の定量化を、綿棒採集と染色培養を用いて示しています。マウス膣内のGBS負荷を定量化するためのサンプル採取、プレート付け、コロニーカウントの手順を概説しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 膣内腔を綿棒で採取してGBS負荷を定量化する

1. マウス1匹につき1.5mlのマイクロ遠心分離チューブを1本、リン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)100μlを加えて準備します。綿棒を採取する直前に、PBSで綿棒を事前に湿らせてください。
2. マウスを拘束し、綿棒を膣内腔に10mm挿入します。綿棒を時計回りに4回、反時計回りに4回優しく回し、膣壁に軽く圧力をかけます。
3. 綿棒を1.5mlのマイクロ遠心分離機チューブに100μlのPBSを投与します。メッキする前に、マイクロ遠心分離機チューブを約15秒ほどボルテックスして、綿棒から細菌を解放します。各サンプルをPBSで連続的に希釈し、製造元の指示に従って調製した差動中寒天プレートに1:10から1:10,000までの希釈20μlをプレートします。プレートを37°Cで24時間培養します。グループB 連鎖球菌 (GBS)のコロニーは鮮やかなピンク色またはモーブ色を呈します。他の内因性植物は抑制されるか、青、白、灰色のコロニーとして現れます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
尿道生殖器、無菌、カルシウムアルギン酸綿棒検査	ピューリタン	25-801 A 50
クロマーガー連鎖球菌	DRGインターナショナル	SB282
ダルベッコのリン酸塩緩衝塩溶液 1回	コーニング	21-031-CV