バクテリオファージ感染のための土壌細菌培養の準備

この記事について

要約

出典: Cross, T. ら、土壌サンプル分離株からアルトロバクターバクテリオファージ種の分離のための最適化された濃縮技術。 J. Vis. Exp.(2015年)

このビデオは、バクテリオファージ生成のための細菌培養の準備方法を示しています。土壌細菌をバッフルフラスコに接種し、曝気と振動による均一な成長を促進し、光学密度測定を用いて細胞密度を監視する手順をカバーしています。培養が最適な成長段階に達すると、効率的なバクテリオファージ生産の準備が整います。

プロトコル

ファージ単離のための関節菌細胞の調製

培養 Arthrobacter sp. KY3901コロニーは、30°Cで2〜3日間培養されたLuria Bertani(LB)寒天プレート上にストライストを施しました。コロニーを選び、滅菌ループでバッフル培養フラスコの250mlのLBブロスに加え、振動インキュベーターで225rpm、30°Cで培養します。
約24時間の増殖期間を設けて、ファージ感染実験のために後期指数関数的または初期定常期細胞を得ます。細菌の増殖状態を注意深く監視し、細胞が中期から後期の定常成長状態に入るのを防ぎます。
注: 細胞増殖は、ファージ分離および精製手順・段階において、光学密度OD₆₀₀₀の範囲で0.5〜0.0.7の範囲で行うべきです。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前	会社	カタログ番号
LBブロスパウダー	フィッシャー	BP9722-2
顆粒入り寒天	フィッシャー	BP1423-2
エッペンドルフ管	フィッシャー	05-408-129
5mlピペット1本	フィッシャー	13-678-11D
50ml円錐管	フィッシャー	76002844
15ml円錐管	フィッシャー	76002845
10mlピペット1個	フィッシャー	13-676-10J
25mlピペットは個別に入っています	フィッシャー	13-676-10K

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