マウスモデルにおけるカテーテル関連尿路感染症

要約

出典: Conover, M. S. ら, J. マウスモデルにおける尿路感染症およびCAUTIの確立と特徴付け。 J. Vis. Exp. (2015年)

このビデオでは、メスのマウスに経尿道カテーテルを組み立てて埋め込み、その後細菌接種を行い、カテーテル関連尿路感染症の確立とバイオフィルム介有の宿主-病原体相互作用の調査を行う手順を実演しています。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. CAUTI(カテーテル関連尿路感染症)モデルプロトコル、CAUTIモデル用カテーテル針準備

1. 30Gの針のキャップを外してください。PE10(ポリエチレン10)チューブを7mm、シリコーンチューブ(RenaSIL)を5mmカットします。PE10チューブを針の根元に触れるまで針に通します。
2. 次に5mmの針をPE10入り針に通します。紫外線(UV)で針の組み立てを一晩中滅菌します。
   注: シリコーンチューブを装填する際は、針先から約1mmのチューブを伸ばしておきます。

2. E. faecalis OG1RF 細菌接種製剤

1. 接種日の48時間前からOG1RF接種源を準備してください。凍結ストックからBHI(ブレインハートインフュージョン)プレートにOG1RFをストリークします。
2. コロニーを選び、10mlのBHIに接種し、37°Cで18時間静置培養します。培養液を遠心分離し、ペレットを1mlの無菌1xPBSで3回洗浄します。
3. 細菌ペレットを1xPBS(リン酸塩緩衝生理食塩水)に再懸浮させます。細菌の光学密度を測定し、所望の接種量に濃度を調整します。使用される接種物の標準濃度は10⁷です。ただし、これは研究の設計によって異なる場合があります

3. カテーテルの埋め込み

1. 作業台を70%エタノールで清掃し、吸収カバーで覆うか(または滅菌フローフードを使用)してください。
2. 空の1ml(結核またはツベルクリン)注射器にカテーテル針を取り付けます。1インチ四方のパルフィルムを切り取り、その上に約10セント硬貨ほどの外科用潤滑剤を少し塗ります。
   注: カテーテルの注入と接種には2種類の針が使用され、機械的な操作による偶発的な接種を最小限に抑えます。これにより、接種針の準備が少なくて済む利便性も可能になります。
3. C57BL/6マウスは、32オンスのガラス瓶に、3mlのイソフルランに浸したコットンボールを入れたティーインフューザーボールや、製造元のプロトコルに従いベーピングチャンバーに入れて、意識を失うまで(1秒あたり1回の呼吸)まで麻酔します。
4. 次にネズミをペーパータオルの上に仰向けにし、足を広げます。マウスの鼻を鼻に鼻のコーンか、約1〜2mlの少量(約1〜2ml)イソフルラン入りの綿球を入れた50mlの円錐形チューブで覆います。
   注意: イソフルランは吸入麻酔薬です。換気の良い場所で使用し、研究者による吸入を最小限に抑えましょう。
5. 膀胱を優しく触診して排尿を促し、膀胱が空くようにしてください。尿道周辺を100%エタノールワイプで拭き取ってください。
6. 尿道周辺を10%ポビドンヨウ素溶液でコットンチップアプリケーターで消毒します。接種針/注射器を先に外科用潤滑剤に軽く当てます。
   注: ポビドンヨウ素はカテーテルの挿入に使われ、アルコールよりも強力な無菌溶液です。カテーテルの埋め込みは、カテーテルを挿入するためにより多くの機械的操作を必要とし、そのため汚染のリスクが高まります。
7. カテーテルを尿道の開口部に挿入します。挿入後、ピンセットで(7mmのPE10)長いカテーテルを膀胱に押し込み、その結果(5mmのシリコン製)小さなカテーテルを膀胱内に注入します。針を7mmチューブがついたまますぐに外してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
カテーテルおよび針の準備材料:
30G針	BDプレシジョングライド	305106	30 G x 1/2(0.3 mm x 13 mm)
PE10ポリエチレンチューブ	BD	427400	内径は-0.011インチ(0.28mm);外径 – 0.024インチ(0.61 mm)
RenaSIL 025 プラチナ硬化シリコンチューブ	ブレイントリー・サイエンティフィック社	義理の妹 025	内径0.012 × 外径0.025、25フィートコイル
感染のための物質:
イソフロッラン – アイソテージア	バトラー・シャイン	29405	250ml
透明ガラス直線型ジャー	キンブル・チェイス	5413289V 21
ステンレス製ティーインフューザー	シェフス・アマゾン		Schefsによるプレミアムリーフティーインフューザー - ステンレススチール製 - 大容量 -
非滅菌コットンボール	フィッシャーブランド	22-456-880
50mlファルコンチューブ	VWR	89039-660
Isotec 3 - ヴェポライザー	オーメダ	1224478
耳パンチ	フィッシャー・サイエンティフィック	13-812-201	(必要に応じて)
ベタジン溶液	ベタジン溶液		10%ポビディヨウ素外用溶液
綿棒	フィッシャー・サイエンティフィック	22-037-924	6インチ
ベンチ用おむつ	フィッシャーブランド	14206 63	吸収性アンダーパッド(20インチ×36インチマット)
外科用潤滑剤	サーギルブ	0281-0205-36
解剖はさみ	ファインサイエンスツールズ、INC	14084-08
マイクロアドソン鉗子	ファインサイエンスツールズ、INC	11018-12
1mlシリンジ	BD	309659	ツベルキュリンスリップチップ
パラフィルム	ベミス	PM996	4インチ×125フィート
エッペンドルフラック	フィッシャーブランド	05-541-1
エッペンドルフ管	中科学	AVX-T-17-C
カテーテル、膀胱、腎臓の採取:
均質化装置	プロ・サイエンティフィックINC	バイオジェンプロ200
5mlポリプロピレン丸底管	BD	352063	臓器均質化のために
ペーパータオル	ジョージア・パシフィック
エタノール	ファームコ・アーパー	11100020S	200プルーフ
コスター™クリアポリスチレン96ウェルプレート	コーニング	3788
1xリン酸塩ナトリウム生理食塩水	シグマ・オルドリッチ	P3813
BRANSONIC 超音波洗浄機 1210	ブランソン超音波コーポレーション	1210