病原性細菌による火傷感染のマウスモデルの確立

要約

出典:Wang, Y. ほかインビボ生物発光イメージングを用いた多剤耐性アシネトバクター・バウマニの火傷感染症に対する抗菌ブルーライト療法の調査。J. Vis. Exp.(2017年)

このビデオでは、加熱した真鍮ブロックを塗布し、その後病原性細菌接種を施すことでマウスモデルに火傷感染を確立する方法を示します。細菌は露出した細胞外マトリックスに定着し、バイオフィルムを形成することで、宿主と病原体相互作用の生体内研究を可能にします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 発光性アシネトバクター・バウマンニによる火傷感染のマウスモデル

1. 7〜8週齢、体重17〜19gの成体のメスのBALB/cマウスを使用します。実験開始の少なくとも3日前は、マウスが実験室の環境に慣れるまで待ちます。21°Cの室温で12時間の明暗サイクルを維持し、 自由に餌と水を与えます。
2. マウスにはケタミン-キシラジンカクテル(100 mg/kg-20 mg/kg)を腹腔内注射して麻酔します。綿棒で各ネズミのパルペブラに軽く触れます。触面反射がないことは適切な麻酔深度を示唆します。麻酔中に目が乾燥しないように、獣医用の軟膏で目を覆いましょう。
3. 50枚刃のヘアバリッパーを使って、できるだけ肌を露出させるために背中のネズミを剃りましょう。
4. 35mmのペトリ皿の蓋を各マウスの腹部の下に置き、背中を比較的水平に保ちます。
5. 250mLのビーカー(80%が満杯)で、10インチ×10インチ、220ボルトの交流(VAC)ホットプレートを使って水を沸騰させます。真鍮製のブロック(断面1cm×1cm)をビーカーに浸し、水との熱平衡が達成されるまで放置します。熱的平衡は通常<5分かかり、ビーカー内の水が再び沸騰することで示されます。
6. 火傷を負う前に、痛みの緩和のために予防的鎮痛剤(0.1 mg/kgのブプレノルフィンを皮下注射)を投与してください。
7. 先制鎮痛剤を投与してから10分後、加熱した真鍮ブロックをマウスの背中の剃られた部分に7秒優しく押し当てて火傷を誘発します。
   注: 作業員の熱傷害を防ぐため、焼却作業中は耐熱手袋を着用してください。
8. 脱水を防ぐために皮下注射で0.5mLの無菌生理食塩水を投与します。
9. 熱損傷が誘発されてから5分後、50μLの細菌懸濁液(5×10⁶コロニー形成単位を含むCFU)をリン酸塩緩衝食塩水(PBS)に接種し、ピペットでマウスに火傷を施します。次に、無菌綿棒でジグザグに皮膚を塗り、アリコートを火傷部分に塗りつけて、焼けた部分の細菌細胞をできるだけ均等に分布させます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マウス	チャールズリバー研究所、ウィルミントン、マサチューセッツ州	BALB/c	生後7〜8週、体重17〜19グラム
アシネトバクター・バウマンニー	ブルック陸軍医療センター、フォートサムヒューストン、テキサス州	臨床分離株	人工発光系統
インスリン注射器	フィッシャー・サイエンティフィック	14-826-79	BD Lo-Dose U-100インスリン注射用注射用
塩化ナトリウム	フィッシャー・サイエンティフィック	721016	0.9%塩化ナトリウム
リン酸塩緩衝生理食塩水、1x溶液	フィッシャー・サイエンティフィック	BP24384	多くの生体分子手法で使用される標準的なリン酸塩バッファー
接種ループ	フィッシャー・サイエンティフィック	22-363-605	マウスの焼け跡面に細菌性イノクルムを塗布するために
真鍮製ブロック	スモールパーツ社、マイアミ、フロリダ州	10 mm × 10 mm	マウスの火傷の発生について
エクストリームドラゴン PBI/ケブラー高温手袋	スーペリア・グローブ・ワークス社、チークトワガ、ニューヨーク州	PBI83514	耐熱性手袋
グライナー料理	シグマ・オルドリッチ社LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
コーニングのデジタルホットプレート	コール・パーマー・インストゥルメント・カンパニーLLC	UX-84301-65	10インチ×10インチ、220VACで沸騰水用
マウス/ラットの細いライン水温手術用ベッド	E-Zシステム	EZ-211	手術中の熱損失や低体温症を防ぎます
獣医軟膏	S&K ファーマ、GmbH	ケラト・ビシロン 5%、アウゲンザルベ	目の乾燥を防ぐための眼科軟膏