マウスの アシネトバクター・バウマン感染による火傷創の生物発光イメージング

要約

出典:Wang, Y. ほかインビボ生物発光イメージングを用いた多剤耐性アシネトバクター・バウマニの火傷感染症に対する抗菌ブルーライト療法の調査。J. Vis. Exp.(2017年)

このビデオは、生物発光オペロンを持つ アシネトバクター・バウマンニー を接種したマウスの火傷感染の画像診断手順を示しています。ルシフェラーゼ触媒による基質酸化が細菌負荷に比例した光を生成することを示し、生物発光イメージングシステムを用いて感染進行のリアルタイムモニタリングを可能にします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウス感染の生物発光イメージング

1. 低照度イメージングシステム(強化電荷結合デバイスカメラ、カメラコントローラー、サンプルチャンバー、画像処理装置)を用いてマウスを撮影します。
2. マウスにはケタミン-キシラジンカクテル(100 mg/kg - 20 mg/kg)を腹腔内注射で麻酔します。綿棒でマウスの触覚を軽く触れます。触面反射がないことは適切な麻酔深度を示唆します。
3. ライブイメージングソフトを起動します。表示されたコントロールパネルで「初期化」をクリックします。温度ボックスの色が緑色に変わるまで待ち、これは試験室内のステージ温度が37°Cに達したことを示します。
4. マウスをイメージングシステムの標本チャンバー内のステージ(37°C)に置き、感染した火傷をカメラの真下に置きます。
   注: 火傷が乾燥すると、細菌の生物発光が低下することがあります。したがって、画像検査前にPBSでマウスの火傷を保湿することが推奨されます。
5. コントロールパネルで「Luminescence」の横にチェックマークをつけてください。「自動露出」を選択すると、生中発光強度に基づいてライブイメージングソフトウェアによって露出時間が最適化されます。
6. 「視野」ドロップダウンリストから「C」を選択してください。「中距離スキャン」オプションを選択して、ソフトウェアが焦点距離を判定してもらうことができます。オーバーレイの横にチェックマークを付けてください。
7. 「取得」をクリックして画像を撮影してください。「画像ラベル編集」ボックスで「OK」をクリックし、「画像ウィンドウ」と「料金計入パレット」が表示されます。
8. 自動選択用の自動ROIパラメータを設定してください。
9. 生物発光強度を相対発光単位(RLU)で定量化し、ピンク(最も強い)から青(最も弱い)までの偽色スケールで表示します。
10. 生物発光強度分析に基づき、マウスの火傷における細菌の生存率を異なる時間点で計算します。ある時点での細菌の生存率 = その時点で測定された生物発光強度 ÷抗菌ブルーライト曝露直前に測定された生物発光強度。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
IVIS	パーキンエルマー社、ウォルサム、マサチューセッツ州	IVIS ルミナ シリーズIII	前臨床のin vivo画像診断
発光ダイオードLED	VieLight Inc、トロント、カナダ	415 nm	照明のための光源
マウス	チャールズリバー研究所、ウィルミントン、マサチューセッツ州	BALB/c	生後7〜8週、体重17〜19グラム
アシネトバクター・バウマンニー	ブルック陸軍医療センター、フォートサムヒューストン、テキサス州	臨床分離株	人工発光系統
グライナー料理	シグマ・オルドリッチ社LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm