マウスモデルにおける火傷の薬剤耐性細菌感染に対するブルーライト療法

要約

出典: Wang, Y. ほか 生物発光イメージングを用いた多剤耐性 アシネトバクター・バウマンの 火傷感染症に対する抗菌ブルーライト療法のin vivo調査。 J. Vis. Exp. (2017年)

この動画では、マウスの生物発光性薬剤耐性菌による火傷感染の治療手順をブルーライト療法で示し、その後、生物発光イメージングで治療効果をモニタリングします。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手技は、地域の施設動物管理委員会およびJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. マウスにおけるA. baumannii感染に対する抗菌ブルーライト療法

1. マウスにはケタミン-キシラジンカクテル(100 mg/kg - 20 mg/kg)を腹腔内注射で麻酔します。触面反射が欠如していることは、適切な麻酔深度を示唆しています。
2. マウスを無作為にaBL処理グループ(n = 10)と未処理対照グループ(n = 10)に分けます。
3. 抗菌ブルーライト(aBL)処理群では、光への過剰曝露を防ぐためにマウスの目をアルミホイルで覆います。ネズミの焼けた部分を発光ダイオード(LED)の真下に直接置き、35mmペトリ皿の蓋をマウス腹部の下に置いて背中を水平に保ちます。
4. ステップ3.5で言及したパワー/エネルギーメーターを、四角いペトリ皿の上のマウスに置き換えてください。マウスの高さを、LED絞りとマウス燃焼表面の距離が、LEDの開口部とパワー/エネルギーメーターの光センサーのレベルと等しい位置に戻します。
5. 感染した火傷を100 mW/cm^²の照射で照射します。aBLを72 J/cm² の用量で投与し、合計360 J/cm² に達するまで(例:0、72、144、216、288、360 J/cm²)に到達します。各光照射後、マウスに対して生物発光イメージングを行います。
6. 未処理の対照群では、aBL処理群と同じ時間間隔でマウスの火傷の生物発光イメージングを行います。
7. マウスの回復前に、熱の損失や低体温症を防ぐために、マウスを水加熱された手術用ベッドに置いてください。マウスの活動と触覚反射を観察し、回復まで観察してください。ネズミの回復後は、ケージごとに2〜3匹飼育してください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
IVIS	パーキンエルマー社、ウォルサム、マサチューセッツ州	IVIS ルミナ シリーズIII	前臨床のin vivo画像診断
発光ダイオードLED	VieLight Inc、トロント、カナダ	415 nm	照明のための光源
パワー/エネルギーメーター	ソーラブス社、ニュージャージー州ニュートン	PM100D	光放射度検出器
マウス	チャールズリバー研究所、ウィルミントン、マサチューセッツ州	BALB/c	生後7〜8週、体重17〜19グラム
アシネトバクター・バウマンニー	ブルック陸軍医療センター、フォートサムヒューストン、テキサス州	臨床分離株	人工発光系統
リン酸塩緩衝生理食塩水、1x溶液	フィッシャー・サイエンティフィック	BP24384	多くの生体分子手法で使用される標準的なリン酸塩バッファー
フィッシャーサイエンティフィック Redi-Tip ピペットチップ、1-200 μL	フィッシャー・サイエンティフィック	02-707-502	ピペットチップ
真鍮ブロック	スモールパーツ社、マイアミ、フロリダ州	10 mm × 10 mm	マウスの火傷の発生について
エクストリームドラゴン PBI/ケブラー ハイヒートグローブ	スーペリア・グローブ・ワークス社、チークトワガ、ニューヨーク州	PBI83514	耐熱手袋
グライナー料理	シグマ・オルドリッチ社LLC	P5112-740EA	35 mm ×10 mm
コーニング・デジタル・ホットプレート	コール・パーマー・インストゥルメント・カンパニーLLC	UX-84301-65	10インチ×10インチ、220VACで沸騰水用
マウス/ラットの細いライン水温手術用ベッド	E-Zシステム	EZ-211	手術中の熱損失や低体温症を防ぎます
獣医軟膏	S&K ファーマ、GmbH	ケラト・ビシロン 5%、アウゲンザルベ	目の乾燥を防ぐための眼科軟膏