生細胞蛍光顕微鏡を用いた細菌の形態変化のイメージング

Abstract

出典: Brzozowski, R. S. ほか 細菌の細胞内タンパク質局在および細胞形態変化を調査するための生細胞蛍光顕微鏡法。 J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオでは、細菌の形態変化をリアルタイムで可視化するためのライブセル蛍光顕微鏡法を実演しています。リアルタイムで高解像度画像を得るためのイメージング、タイムラプス取得、デコンボリューションの手順を概説しています。

Protocol

1. イメージング

1. 実験当日、顕微鏡システムを起動しろ。デスクトップの該当アイコンをクリックして画像ソフトウェア(材料 表参照)を起動してください。ソフトウェアの起動ダイアログボックスにある「 顕微鏡の初期化 」オプション(顕微鏡が表示されたボタン)をクリックして顕微鏡を初期化します。初期化前に顕微鏡の粗調整で対物レンズを完全に下げることを確実にしてください。
   注: 初期化後、スタートメニューに加えて、resolve3D、データ収集、フィルターモニターの3つのダイアログボックスが表示されます。
2. 製造元が提供した100倍オイル浸漬物レンズ(数値絞り=1.4、作業距離=0.12mm; 材料表参照)に1.517(屈折率)のオイルを滴します。
   注: 画像検査を行う温度に適した浸漬油を選ぶことが重要です。
3. サンプルを入れたガラスの底皿を金属製のハウジング(棺)に入れ、優しくステージクランプに滑り込ませます。
4. 粗い調整ノブを使って対物鏡を持ち上げ、オイルが皿のガラス底に触れるまで調整します。接眼レンズと微調整ノブを使ってサンプルをピントに合わせます。セルがピントが合ったら、顕微鏡本体前面にあるセレクタースイッチを左に動かして、接眼レンズからカメラモードにノブを回します。
5. 画像診断....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
アガロース	フィッシャー・バイオリエージェント	BP160-100	分子生物学グレード - 低EEO
FM4-64	インビトロジェン	T3166	顕微鏡
ガラス製ボトムディッシュ	マットテック	P35G-1.5-14-C	顕微鏡
顕微鏡	GE	デルタビジョン・エリート	カスタマイズされたオリンパスIX-71逆立顕微鏡スタンド;カスタム照明塔と透過光照明モジュール。対物レンズ:PLAPON 60X(N.A. 1.42、WD 0.15 mm);OLY 100Xオイル(N.A. 1.4、WD 0.12 MM);100XオブジェクティブのDICプリズム・ノマルスキ;CoolSnap HQ2カメラ;SSIアセンブリー7色;環境制御チャンバー - 不透明。
PC190723	ミリポーアシグマ	3445805MG	FtsZ阻害剤
ソフトウォークス	GE		メーカー提供のイメージングソフトウェア