in vitro細菌バイオフィルム形成のためのチャンバー付きカバーグラス法

要約

出典: Beaudoin, T. ほか。チャンバー付きカバーグラスモデルを用いた、バイオフィルム発生に対する喀痰の影響の可視化。 J. Vis. Exp.(2016年)

このビデオでは、嚢胞性線維症患者由来の喀痰宿主因子が細菌のバイオフィルム発生に与える影響を研究するためにチャンバー付きカバーグラスを用いる方法を示しています。

プロトコル

サンプル採取に関わるすべての手続きは、研究所のIRBガイドラインに従って実施されています。

1. バイオフィルム形成のためのチャンバー付きカバーグラス法
   1. 目的のある細菌分離株を、目的の培地で37°Cで一晩、振って(200rpm)培養します。
      注: 臨床分離株である 緑膿菌、 黄色ブドウ球菌、 ブルクホルデリア・セパシア 複合体、 アクロモバクター・キシロソキシダン など、さまざまな細菌が使用されました。培地の選択は株や関心のある条件によって異なりますが、初期実験には(Luriaブロス)LB培地を使用することが可能です。
   2. 一晩培養後、40μlの培養液を4mlの新鮮培地に入れ、37°Cで振って3〜4時間(200 RPM)培養すると、600 nm(OD600)で約0.5〜0.6の光学密度を持つ培養が得られます。
   3. 培養をステップ1.2から1/5に希釈し、10%の痰ろ過液を含むか、対照として痰ろ過なしの対象で希釈します。他の痰のろ過濃度(50 %または100%)も検査可能です。
   4. 希釈液200μlを使ってスライドチャンバーの井戸をまきます。
   5. 37°Cで4時間、バクテリアが振動せずに付着させてください。
   6. 4時間後に培地を取り出し、バイオフィルムを1倍の新鮮な培地で優しく洗います。200μlの新しい培地に交換してください。
      注: バイオフィルムへの喀痰の影響を調べるには、新鮮な培地に痰上清液が含まれている必要があります。
   7. バイオフィルムを37°Cで所定の時間振動せずに成長させ、12時間ごとに培地を交換し、洗わず顕微鏡検査の時間まで行います。
      注: 痰の上清液がバイオフィルム抗生物質感受性に与える影響を研究するために、抗生物質はバイオフィルム成長24時間後に培地に加えられ、バイオフィルムの染色および画像検査まで培地内に保持されます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Lab-Tek II チャンバー付きカバーガラス、#1.5ホウケイ酸塩、8ウェル	サーモ・シヒャー・サイエンティフィック	155409
ミラーズLBブロス	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	12780-052	夜間成長/バイオフィルム成長用の標準培地