嚢胞性線維症患者の痰を濾過した細菌バイオフィルムの共焦点イメージング

要約

出典: Beaudoin, T. ほか。 チャンバー付きカバーグラスモデルを用いた、バイオフィルム発生に対する喀痰の影響の可視化。 J. Vis. Exp. (2016年)

このビデオでは、患者由来の嚢胞性線維症痰が細菌バイオフィルム形成にどのように影響するかを評価する in vitro 法を実演しています。チャンバースライド、蛍光染色、共焦点顕微鏡を用いて、喀痰で培養されたバイオフィルムにおいて厚みの増加、構造の変化、生存バイオマスの増加を明らかにし、バイオフィルム形成における宿主成分の役割を強調しています。

プロトコル

サンプル採取に関わるすべての手続きは、研究所のIRBガイドラインに従って実施されています。

バイオフィルムの染色と共焦点顕微鏡

1. 望ましい成長時間(24〜48時間)が最適で、チャンバーウェルから培地を取り出し、各チャンバーを300μlの滅菌PBSで優しく2回洗浄します。
2. バイオフィルム用の染色混合物は、必要な溶液1mlごとにバイアビリティキットに付属の各染料1μlを混合して準備します。染料を水や培地溶液で作ってください。

注: 水はメーカーによって推奨されています。

3. 各チャンバー付きカバーガラスのウェルに200μlの染料混合物を加え、室温で暗闇で45分間培養します。
4. チャンバーから染色混合物を取り出し、各ウェルを300μlの滅菌PBSで洗浄します。PBSを取り除き、新鮮な水や培地に交換してください。
5. 共焦点顕微鏡によるバイオフィルムの可視化を進めてください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Lab-Tek II チャンバー付きカバーガラス、#1.5ホウケイ酸塩、8ウェル	サーモ・シヒャー・サイエンティフィック	155409
フィルムトレーサー ライブ/デッドバイオフィルムビアビリティキット	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	L10316
ミラーズLBブロス	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	12780-052	夜間のゴウス/バイオフィルム増殖用の標準培地
リン酸塩緩衝生理食塩水(Dulbecco A)	オキソイド	BR0014G	培地除去後のバイオフィルムチャンバーの洗浄
ツァイス・アクシオヴェール 200M	カール・ツァイス