土壌のないシステムにおける シロイナドプシス・タリアナ 根の細菌定着の監視

要約

出典: Harris, S. L. ほか浮遊式水耕栽培システムにおける シロイナズプシス・タリアナ 根の細菌定着と維持管理のモニタリング。 J. Vis. Exp. (2019年)

この動画は、土壌のない土壌で育つ シロイヌナ の苗木における根関連細菌の定着を監視するためのプロトコルを示しています。コロニー定着後、細菌は超音波処理で取り除かれ、希釈・プレート化され、細菌の付着と生存可能性を反映したコロニーを形成するために培養されます。

プロトコル

生存細胞数のための細菌の収集

注: 苗根あたりの細菌数は、どの孵化時間点でも決定可能です。コロニー化は0時間から18時間の間に監視でき、18時間以降は維持管理が可能です。

1. 苗をメッシュから取り出します (図1、ステップ5)。葉の下には炎で滅菌された鉗子を優しく置き(ただしメッシュの葉側)、茎を軽くつまみます。苗を網目から離して動かして根を折らずに外してください。根が折れた場合は、網目の底を優しくこすって全長を集めてください。
2. 植物の根から細菌を取り除きましょう。細菌を24ウェルプレートのウェルに移し、1 mLのddH_2.0を含みます。サンプルをソニック処理してください。
3. 根の細菌を定量化してください。
   1. 超音波処理されたサンプルを細菌増殖培地で最大10〜⁶ 倍の希釈まで連続的に希釈します。各希釈物を50μLずつ寒天培地に加え、滅菌ガラスビーズで広げます。細菌に最適な温度で培植板を培養し、個々のコロニーがカウント可能になるまで続けます。

結果

図1:A. thaliana根の細菌定着と維持のためのアッセイ。滅菌プラスチックメッシュ上で育てられたA. thalianaの苗は、細菌に最適化された培地に移されました[こちら、0.1 x LB(Luria Broth)Lennox]。その後、細菌が根に18時間かけて定着し、植物は揺れる液体の中で浮かんでいました。洗浄後、コロニー化したフロートは植物に最適化された成長培地(0.5x MS + MES)に72時間移され、根の細菌の維持を検証しました。フロートは...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
24ウェルプレート	BDファルコン	1801343
炎
鉗子
インキュベーター			指定された細菌の成長に最適な温度で
無菌水
超音波検査器
24ピン超音波装置アタッチメント			複数のサンプルを同時に超音波処理するためです。個別に行うことも可能です
ガラスビーズ
マルチペッター/リペッター
滅菌96ウェルプレート			連続希釈のために。エッペンドルフ管で代替可能です
シロイナドプシス・タリアナの種子			種子資源についてはシロイナドプシス生物資源センターをおすすめします
Pseudomonas simiae WCS417r