成長調節タンパク質のイメージング用シアノバクテリア色素の光漂白

要約

出典: Zhan, Y., 他光漂白により、 シアノバクテリア属プロクロロコッカスのFtsZ環の超分解能イメージングが可能になります。J . Vis. Exp. (2018)。

このビデオでは、冷たい条件下でキセノン光を用いてシアノバクテリア細胞内の光漂白を行い、成長調節タンパク質の蛍光イメージングを改善する手順を実演しています。

プロトコル

1. ブロッキングステップにおけるクロロフィル色素の光漂白

1. カバースリップをステイン皿に移します。カバースリップの上に、0.2%(v/v)の非イオン性洗剤100と3%(v/v)のヤギ血清を含むブロッキングバッファー50μLを加えます。
2. 染色板全体を氷の上に置き、キセノン光源の下に移動させ、光の強度は1,800μmol/m^²・sで少なくとも60分間光漂白します。
3. フォトブリーチとブロッキングの後、ペーパータオルの縁でブロッキングバッファーを慎重に取り除きます。
   注: キセノン光の強度が非常に高いため、目の保護には適切なサングラスが必要です。その間、光源とプレートをアルミホイルで包んで、光漏れを防ぐと目のダメージが起きるのを防ぎましょう。カバースリップが15分ごとに湿っているか確認してください。乾燥している場合は、ブロッキングバッファーを50μL加えます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ポリスチレン粒子	スフェロテック	PP-20-10	2.0〜2.4μm
カバースリップ	マリエンフェルト	111580	∅18mm、厚さNo.1
エタノール	シャルラウ	ET00021000
ポリL-リシン臭化水素化物	シグマ・オルドリッチ	P9155	分子量70,000〜150,000
パラホルムアルデヒド	シグマ・オルドリッチ	158127
グルターアルデヒド溶液、50%	シグマ・オルドリッチ	340855
PBS	シグマ	P3813
トライトン X-100	シグマ	T8787
EDTA二ナトリウム塩、2-ハイドレート	ゴールドバイオテクノロジー	E-210-500
トリズマ基地	シグマ	T1503
リソザイム	シグマ	L6876
ヤギ血清	シグマ	G9023
XD-300キセノン光源			250W