ショウジョウバエ幼虫における細菌感染の確立

要約

出典: Hiroyasu, A., D ら、微生物 感染と分析のための ショウジョウバエ 幼虫からの血球抽出。 J. Vis. Exp. (2018年)

この動画では、 ショウジョウバエ の幼虫を細菌の液滴に入れてタングステン針で刺すことで細菌感染を確立する手順を実演しています。幼虫は溝のある栄養豊富な寒天プレート上で培養され、宿主と病原体の相互作用を研究します。

プロトコル

1. 生体内感染

1. ショ ウジョウバエ の果汁用寒天プレートを室温で15分間温めます。
   1. 700mLの水に30gの寒天を加え、40分間オートクレーブします。
   2. メチルパラベン0.5gを絶対エタノール10mLに溶かします。
   3. メチルパラベン溶液を300mLの果汁濃縮液に加えます。
   4. ジュース濃縮液をオートクレーブした寒天溶液に素早く混ぜ、5mLを10×35mmのペトリ皿に注ぎます。
   5. プレートを15分冷やした後、4°Cで保存します。
2. 第3齢幼虫を準備します。
3. 酵母ペーストを寒天プレートに置きます。乾燥を防ぐために幼虫が移動できるように寒天プレートに細かいカットを入れます(図1A)。0.001mmの尖ったタングステン針を固定鉗子でパラフィンフィルムで組み立てます(図1B、C)。
4. 高滴価mCherry発現コキシエラ・バーネティイ (5.95×10⁹ GE/mL)50 μLをパラフィンフィルムにピペットし、立体顕微鏡下で幼虫を細菌のプールに入れます。
5. 幼虫を細菌のプールに入れ、タングステン針で刺し(図3D)、寒天プレート(図1E)....

結果

図1: 生体内感染。 A) ショウジョウバエ 、果汁、寒天プレート、酵母ペーストは 生体内 感染幼虫の培養に使用されます。幼虫の寿命を延ばすために寒天板に切り込みを入れます(灰色の矢印)。B) 0.001mmの尖ったタングステン針をパラフィンフィルムでピンセットに取り付ける。C) 0.001mmの尖ったタングステン針の先端。D) 幼虫を立体顕微鏡下のパラフィンフィルムの病原体プールにタングステン針で刺します。E) 刺さ.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
立体顕微鏡	アンスコープ	SM-1BSZ-L6W
鉗子	VWR	82027-402
コキシエラ・ベルネティイ - mCherry	ハインツェン医師
ショウジョウバエ の果汁皿	コールドスプリング港のプロトコル		http://cshprotocols.cshlp.org/content/2007/9/pdb.rec11113.full
寒天	フィッシャー・バイオリエージェント	BP1423-500
メチルパラベン	アムレスコ	0572-500G
絶対エタノール	フィッシャー・バイオリエージェント	BP2818-500
ウェルチの100%グレープジュース冷凍濃縮液、340mL	アマゾン	B0025UJVGM
ペトリ皿、10×35mm。	フィッシャー・サイエンティフィック	08-757-100A
酵母、ベーカーズドライアクティブ	MPバイオメディカル	210140001	酵母1割に水2割を加えます(v/v)
タングステン針	ファインサイエンスツール	10130-20
鉗子保持	VWR	HS8313
リステリア・モノサイトゲネス	ATCC	ひずみ:10403S	リステリア・モノサイトゲネス 株10403S(Bishop and Hinrichs, 1987)は、30°Cで50μg/mlのストレプトマイシンを含むDifco脳心臓注入(BHI)ブロス(BD Biosciences)で培養されました。