方法論記事

有精卵の尿膜液からのウイルスの精製

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2026年8月31日

この記事について

要約

出典： Yates, J. G. E., 他 アロントイス液からの高タイター組換えニューカッスル病ウイルスの調製 J. Vis. Exp. (2022)

このビデオでは、ウイルス感染させた鶏胚卵から採取し、清澄化した尿囊液からウイルス粒子を精製および濃縮する方法を実演します。ここでは、完全なウイルスを単離するためのデプスろ過、タンジェンシャルフローろ過、密度勾配超遠心分離を含む一連のろ過および分離ステップを紹介します。次に、ウイルス含有量の多い分画を透析して、拡散により残留塩および勾配成分を除去し、続いて高張液を用いた浸透圧による濃縮を行います。その結果、実験に使用可能な精製された高タイターのウイルス調製物が得られます。

プロトコル

1. 特定病原体未感染（SPF）鶏胚卵を用いたニューカッスル病ウイルス（NDV）の増殖

  1. 特定病原体不在（SPF）鶏胚卵への接種
    注：通常、in vivoグレードのニューカッスル病ウイルス（NDV）を1バッチ作製するために、SPF鶏胚卵を8ダース使用します。輸送中の破損や生存率の変動を考慮し、1〜2ダースの予備の卵を注文してください。
    1. SPF鶏胚卵を受領後、卵孵化器にて37 °C、湿度60%で9日間孵化させます。孵化器が1時間ごとに卵を自動的に揺動/回転させる設定になっていることを確認してください。
      注：卵は室温で最大24時間、または4 °Cで最大72時間保存可能ですが、胚の生存率が低下する可能性があります。
    2. 孵化から8〜11日後（理想的には9日目）に、卵を検卵して胚の生存率を判定します。生存胚の指標として、網目状の血管系（Figure 1A）と胚の動きを確認します。これらの特徴が見られない卵は廃棄します（Figure 1B）。
    3. 生存している卵の、気室と胚の境界部分に鉛筆で「X」印を付けます（Figure 1A）。この接種部位が血管系の穿孔を引き起こさないように注意してください。接種液を準備する間、印を付けた卵を孵化器に戻します。
    4. すべてのSPF鶏胚卵に接種するために必要なウイルス量を算出します。各卵に100 plaque-forming units (PFU)のウイルスを100 µLの容量で接種するようにします。ウイルスをリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で希釈し、濃度を1 × 103 PFU/mLにします。ウイルス投与時の誤差を考慮し、接種液を20%多めに準備します。
    5. 帯電防止ワイプを使用し、印を付けた卵の上部を70%エタノールで希釈した10%ヨード溶液で清浄します。溶液が乾くまで約1〜2分待ちます。
    6. 滅菌済みの鋭いピンセットを使用して、殻に注意深く穴を開けます。卵ごとにピンセットを70%エタノールで消毒してください。
    7. 1 mLシリンジと25 G針を用い、ステップ1.1.4で準備した接種液100 µLを絨毛尿膜腔に注入します（Figure 1C）。針を卵に対してほぼ90°の角度で近づけます。針を絨毛尿膜の最上部にのみ挿入してください。
    8. 接種後、マニキュアで穿刺部位を塞ぎ、卵を孵化器に戻します。接種後24時間まで揺動設定をONにしてください。
    9. 接種後24時間で卵の生存率を確認します。絨毛尿膜に血管系がなく、胚の動きが見られない死亡卵を廃棄します（Figure 1B）。
      注：これらの卵はNDVによるものではなく、接種工程によって死亡したものです。
    10. 尿膜液への卵白タンパク質の混入を防ぐため、揺動設定をOFFにして卵を孵化器に戻します。
    11. ステップ1.1.9に記載の方法で12〜24時間ごとに卵を確認し、死亡卵を特定します。接種後24時間以降に死亡した卵は、自家融解を最小限に抑えるために4 °Cに移動させます。冷却後2〜12時間以内に尿膜液を回収します。
    12. 卵を少なくとも72時間孵化させます。
      注：NDVの中病原性株を増殖させる場合、最適な孵化時間は60〜72時間です。孵化時間が長すぎると尿膜液の透明度が低下し、精製工程に支障をきたす可能性があります。低病原性NDV株を増殖させる場合は、胚を死に至らせるまでにより長い時間を要するため、この問題はそれほど重要ではありません。
    13. 適切な孵化期間の後、尿膜液を回収する前に残りの卵を4 °Cで2〜12時間保持します。
  2. NDVを含む尿膜液の回収
    1. 冷却した卵をバイオセーフティキャビネット内に移動させます。卵の上部を70%エタノールで清浄します。
    2. 滅菌済みのピンセットと外科用ハサミを使用し、気室がある卵の頂端側を開きます。
    3. 殻を取り除き、絨毛尿膜を露出させます（Figure 1D）。
    4. 膜を注意深く穿刺して剥がし、尿膜腔を露出させます（Figure 1E）。卵黄嚢を誤って穿刺すると卵が汚染されるため、注意してください。
    5. 鈍端鉗子で胚を掴み、胚嚢を開きます。
      注：胚嚢内部の液体にもNDVが含まれています。
    6. 鉗子で胚を押し下げ、10 mLセロロジカルピペットを使用して尿膜液を回収します。
    7. 清澄化まで、尿膜液を15 mLコニカルチューブに入れて氷上で保存します。
      注：尿膜液が黄色い場合は卵黄嚢が破損しているため、その尿膜液は廃棄してください。
    8. 尿膜液を含むコニカルチューブを、4 °Cで1,500 × g、10分間遠心分離します。
    9. 一時停止ポイント：清澄化した尿膜液を50 mLコニカルチューブに分注します。長期保存（数週間から数ヶ月）の場合は、凍結融解によるウイルスの損傷を防ぐためにスクロースを最終濃度5%になるように添加し、-80 °Cで保存します。短期間（1〜3日）保存する場合は、尿膜液にスクロース（最終5%）または3× マンニトール・リジン（ML）緩衝液（15% マンニトール、3% リジン）を添加して最終濃度を1×（5% マンニトール、1% リジン）にし、4 °Cで保存します。

2. 尿囊液からのNDVの精製

  1. 尿囊液のデプスろ過
    1. 清澄化した尿囊液を-80 °Cで保存し、精製の前夜に4 °Cで解凍する。
    2. 生物安全キャビネット内で、Figure 2に示すようにチューブとペリスタルティックポンプをセットアップする。
    3. まだ行っていない場合は、尿囊液に3× MLバッファーを加え、最終濃度を1×にする。
    4. デプスフィルターを取り付ける前に、0.5 M 水酸化ナトリウム（NaOH）50 mLをシステムに通して廃液容器に排出し、チューブを滅菌する。
    5. 滅菌済みの分子生物学グレードの水 100 mLをシステムに通して廃液容器に排出し、チューブをすすぐ。
      注意： NaOHはNDVを不活化するため、ウイルスを含む尿囊液を導入する前にラインを十分に洗浄することが重要である。
    6. PBS 50 mLを流してシステムをプライミングし、チューブにPBSが約5 mL残ったところでポンプを停止する。
    7. 保持定格1-3 µMのデプスフィルターをチューブに取り付け、デプスフィルター上部の第2キャップを取り外してフィルターをベントする。さらにPBS 50 mLをシステムに流し始める。
    8. フィルター上部のベントからPBSが流れ始めたら、ポートを閉じてラインにPBSを流し続ける。
      注意： 少量の気泡は許容されるが、大量の空気が存在する場合は、ステップ2.1.7および2.1.8に従って再度フィルターをベントする必要がある。
    9. チューブにPBSが約5 mL残ったところでポンプを停止する。
    10. 廃液容器を新しい滅菌回収容器に交換し、尿囊液をデプスフィルターに通し始める。
      注意： ウイルスのせん断が起こるため、圧力は10 psiを超えないようにすること。圧力は、ポンプの流量を減少または増加させることで調整できる。圧力が10 psiを超え始め、流量をそれ以上下げられない場合は、新しいデプスフィルターを使用する必要がある。その場合、尿囊液の通液を再開する前にステップ2.1.6～2.1.8を行う必要がある。
    11. すべての尿囊液がフィルターを通過したら、ウイルスの回収率を最大にするために、1× MLバッファー 50 mLをラインに通す。
    12. ラインが空になるまで液体を回収する。ウイルスを4 °Cで一晩または最大36時間保存する。
      注意： デプスろ過を行った後は、ろ過完了から36時間以内に精製工程を継続すること。
    13. デプスフィルターを取り外し、0.5 M NaOHで保存する前に、0.5 M NaOHおよび42 °Cに予熱した400 ppmの漂白剤 100 mLをシステムに通してチューブを衛生処理する。
  2. NDV濃縮のためのタンジェンシャルフローろ過
    1. 生物安全キャビネット内で、Figure 3Aに示すようにカセットのコンポーネントを組み立てる。
      注意： マニホールドとエンドプレートは、使用前に洗剤で洗浄し乾燥させること。シリコンガスケットは再利用可能であり、カセットと一緒に0.5 M NaOH中で保存すること。
    2. タンジェンシャルフローろ過（TFF）（クロスフローろ過とも呼ばれる）システムを「オープン」構成でセットアップする（Figure 3B）。
      1. カセットを初めて使用する場合は、TFFカセットを溶出構成で組み立て、滅菌済みの分子生物学グレードの水 100 mLでフラッシュする（Figure 3C）。
      2. リザーバータンクに水が5 mLだけ残ったら、ポンプを一時停止し、TFFシステムのセットアップをクローズド構成に変更する（Figure 3D）。
      3. 42 °Cに予熱した0.5 M NaOHおよび400 ppm漂白剤 100 mLをリザーバーに加え、30～60分間システム内で循環させる。
      4. フローを一時停止し、TFFシステムを溶出セットアップに戻して、フローを再開し洗浄液を溶出させる。
      5. リザーバーに約5 mL残ったら、ポンプを一時停止し、滅菌済みの分子生物学グレードの水 100 mLを加えてシステムをすすぐ。
      6. リザーバーに約5 mL残ったら、ポンプを一時停止し、TFFシステムをオープン構成にする（Figure 3B）。ステップ2.2.3に進む。
    3. ペリスタルティックポンプを使用して0.5 M NaOH 100 mLをシステムに通し、カセットとチューブを滅菌する。カセットの完全性を維持するため、圧力が30 psiを超えないようにすること。
    4. リザーバーに0.5 M NaOHが約5 mL残ったところでポンプを一時停止する。
    5. 滅菌済みの分子生物学グレードの水 100 mLをリザーバーに加え、再び液体をカセットに通す。ウイルスの不活化を防ぐため、リザーバーを回して側壁からすべてのNaOHを洗い流す。リザーバーの洗浄ステップを繰り返す。
    6. リザーバーに滅菌済みの分子生物学グレードの水が約5 mL残ったら、ポンプを一時停止する。
    7. PBS 100 mLをリザーバーに加え、回して滅菌済みの分子生物学グレードの水が側壁から洗い流されるようにする。カセットへの液体のフローを再開する。
    8. リザーバーに約5 mL残ったら、ポンプを一時停止し、デプスろ過済みの尿囊液をリザーバーに加えて、ポンプのフローを再開する。
    9. 圧力計1（Figure 3B）を監視し、ウイルスのせん断を防ぐため、10 psiを超えないようにすること。ペリスタルティックポンプの速度とCクランプを組み合わせて、廃液への溶出量を増やす。
      注意： ペリスタルティックポンプの速度とCクランプを併用すると、圧力が増加する。
    10. リザーバーに尿囊液が50～100 mL残ったところで、ポンプを一時停止し、1× MLバッファー 150～200 mLを加えてバッファー交換を行う。
    11. ポンプのフローを再開し、再び圧力計1（Figure 3B）を監視して10 psiを超えないようにすること。
    12. リザーバーに5～10 mL残ったら、ポンプを一時停止する。
    13. 2つのCクランプを使用して、Figure 3Cに示すように2つの廃液ラインを閉じる。
    14. リザーバーに供給しているリテンテートラインを切り離し、50 mLコニカルチューブに挿入する（Figure 3C）。
    15. ポンプのフローを再開し、リザーバータンクに液体が数滴残ったところで一時停止する。
    16. 廃液ラインからCクランプを取り外し、リテンテート供給ラインをリザーバータンクに再接続する（Figure 3B）。
    17. 1× MLバッファー 20～25 mLを加え、リザーバータンクに約5 mL残るまでポンプのフローを再開する。
    18. ステップ2.2.13から2.2.16を繰り返す。
      注意： ウイルス収量を増やすために、ステップ2.2.17および2.2.13～2.2.16を繰り返して3回目の溶出を行うことができる。ただし、ウイルスの大部分は最初の2回の溶出に含まれている。
    19. 溶出が完了したら、ウイルスを氷上または4 °Cで保持する。
    20. ラインを洗浄するには、Figure 3Dに示すように、廃液ラインがリザーバーに戻るクローズドループ形式（Figure 3D）にシステムをセットアップする。
    21. 42 °Cに予熱した0.5 M NaOHおよび400 ppm漂白剤 250 mLを加えて、システムを洗浄する。
    22. 洗浄液をシステム内で一晩流す。
      注意： 洗浄液を再循環させる際、ポンプを50 mL/minの速度で運転すると、圧力は約5 psiになるはずである。圧力がこれを超える場合は、カセットが汚れているため、洗浄液を交換してプロセスを繰り返す必要がある。
    23. 両方の廃液ラインとリテンテートラインを廃液容器に向け、洗浄液を溶出させる。
    24. リザーバーに滅菌水 400～500 mLを加え、システムを通して廃液容器に流す。
    25. リザーバーに約5 mL残ったら、ポンプを一時停止し、0.5 M NaOH 100～200 mLをリザーバータンクに加え、溶液を回してリザーバー容器を洗浄する。
    26. リザーバーがほぼ空になったら、ステップ2.2.23をさらに2回繰り返す。
    27. TFFセットアップを解体し、TFFカセットとガスケットを少量の0.5 M NaOHに入れ、密閉可能なプラスチック袋に入れて4 °Cで保存する。
      注意： チューブは0.5 M NaOHに浸した状態で室温で保存できる。
  3. Iodixanol密度勾配超遠心分離
    1. 超遠心機をオンにし、4 °Cに予冷するように設定する。使用するローターも同様に4 °Cで予冷する（Table of Materialsを参照）。
      注意： ローターは4 °Cで保存すること。
    2. ストックの60% iodixanol溶液（購入時の濃度）を使用し、PBSおよび3× MLバッファーで希釈してMLバッファーの最終濃度を1×にし、40%、20%、および10%のiodixanol溶液を作成する。
    3. 13.2 mLのオープントップ薄壁超遠心管に、40%、20%、および10%のiodixanol溶液をそれぞれ0.5 mL、2.5 mL、2.5 mLの順に重ねる（Figure 4A）。
      注意： 超遠心管を横に傾けてゆっくりと溶液を注入すると、2つの勾配層が混ざるリスクを大幅に減らすことができる。各層の分離が明確であり、勾配の各層の間に「ハロー（光輪）」が見えるはずである。
    4. マーカーペンを使用して、さまざまな勾配層の界面に印をつける。
    5. TFF手順で溶出したウイルス 6～6.5 mLを密度勾配の上に重ねる。密度勾配を乱さないよう、ステップ2.3.3に従って慎重にウイルスを加える。
    6. スイングバケットローター用のインサート（Table of Materialsを参照）に超遠心管をロードし、オープントップ天秤を使用してインサート間の重量差を0.01 g以内に調整する。重量差の調整には、PBSまたは余剰のウイルス溶出液を使用する。
    7. チューブのバランスが取れたら、キャップをしてローターにロードする。
    8. 4 °C、125,000 × gで1.5時間遠心分離する。
      注意： ディレイスタート機能付きの超遠心機が利用可能な場合は、一晩で行うことができる。
    9. 超遠心分離後、滅菌ピンセットを使用してチューブを取り出す。10%と20%の勾配の間に現れる標的の大きなバンドを確認する（Figure 4B）。
    10. レトルトスタンドを使用して、ビーカーの上にチューブを吊るす。
    11. 5 mLシリンジに18 G × 1.5インチの針を取り付け、超遠心管の側面を穿刺する。
      注意： チューブは標的バンドのわずかに下を穿刺し、針を上向きの角度に、またベベルを上にして、標的バンド内に進むようにすること。
    12. プランジャーをゆっくりと押し出し、標的バンドを回収する。
      注意： 回収量を最大にするため、針を標的バンド内で動かす。他のバンドやデブリが標的バンドに混入しないよう注意し、また過剰な溶液を採取しないようにすること（透析カセットの使用量が増えるため）。
    13. 標的バンドの抽出が完了したら、針を抜き、残りの溶液を廃液ビーカーに流し出す。すべての超遠心管からすべてのバンドを抽出するまで、標的バンドを50 mLコニカルチューブに分注する。
    14. すべての超遠心管からすべての標的バンドが抽出されるまで、ステップ2.3.10～2.3.13を繰り返す。
    15. ステップ2.3.10～2.3.13で説明した標的バンド抽出の代替アプローチ
      1. ピペットを使用して、標的バンド上の液体をゆっくりと除去する。標的バンドに達したら、ピペットで抽出し、ウイルスを50 mLコニカルチューブに保存する。
        注意： この方法により、超遠心管を再利用できる。
  4. ウイルス溶液からのiodixanolの除去
    注意： NDVを含むバンドは、15%から16%の間のiodixanol密度に現れる。溶液中のiodixanol濃度は、標準曲線に対する340 nmでの吸光度を測定することで決定できる。この濃度のiodixanol溶液をC57BL/6マウスに投与した際、悪影響や急性毒性は観察されなかったため、このステップは省略可能である。
    1. 0.5-3 mL、10 kDa 分子量カットオフの透析カセットをPBSに1分間浸してプレウェットする。
      注意： 透析膜は滑らかな状態から、しわ寄ったまたは凹凸のある外観に変化するはずである。抽出したウイルスの量が10 mLを超える場合は、0.5-3 mLの透析カセット2枚、または5-12 mLの透析カセット1枚を使用すること。
    2. 必要に応じて、5 mLまたは10 mLのシリンジと18 G × 1.5インチの鈍端針を使用して、50 mLコニカルチューブからウイルスを回収する。
    3. シリンジを使用して透析カセットに挿入し、膜を突き破らないように注意してウイルスを注入する。
      注意： 透析カセットを回転させて、カセット内のエアポケットの位置を調整できる。針をカセットから抜く前に、エアポケットを除去すること。
    4. 1 Lビーカーに滅菌済みの1× PBSを満たし、スターラーバーと透析カセットを入れて蓋をする。緩やかに攪拌しながら4 °Cでインキュベートする。
      注意： 押出成形ポリスチレンフォームとゴムバンドを使用して透析カセットを固定し、PBSに浮くようにする。MLバッファーにより、カセットがわずかに膨張することがある。
    5. 1～2時間後、新鮮な1× PBSに交換し、緩やかに攪拌しながらさらに8～10時間4 °Cでインキュベートし続ける。
      注意： これは一晩で行うこともできる。
    6. もう一度新鮮な1× PBSに交換し、室温で1～2時間インキュベートする。
  5. ウイルス溶液の濃縮
    1. 透析カセットを透析バッファーから取り出し（Figure 4C）、小さな密閉可能なプラスチック袋に入れる。透析カセットが完全に浸るように、40% 20,000 MW ポリエチレングリコール 15～25 mLを加える。
    2. ロッキングしながら室温でインキュベートする。5 mLまたは10 mLのシリンジと18 G × 1.5インチの鈍端針を使用して、カセット内のウイルスの量を定期的に確認する。
      注意： ウイルスの濃縮に必要な時間は、開始量と目標の最終量によって異なる。通常、尿囊液の開始量に関わらず、最終目標量は1～1.5 mLである。量を確認する際は、ポートの完全性が損なわれ、ポリエチレングリコール溶液とウイルスが混ざる可能性があるため、同じポートを使用しないように注意すること。
    3. 濃縮ウイルスを透析カセットから取り出す前に、カセットを1× PBSで軽くすすぎ、18 G × 1.5インチの鈍端針に空気を満たす。
    4. 空気を入れたシリンジを透析カセットに挿入し、プランジャーを押す。導入した空気が混入することなく濃縮ウイルスを取り出せるように装置を回転させる。
    5. 濃縮ウイルスを50 mLコニカルチューブに分注し、分注量を記録する。
    6. 同じシリンジと針を使用して、先に回収したウイルスと合わせた時に最終濃度が5% sucroseになるよう、適切な量の60% sucroseを透析カセットに注入する。
    7. 手袋をはめた指で膜をマッサージし、膜に付着している可能性のある残留ウイルスを剥離させる。この際、膜を傷つけないように注意すること。剥離プロセスを容易にするため、透析カセット内の余分な空気をいくらか除く。
    8. この洗浄液を、すでに50 mLコニカルチューブに入っているウイルスと合わせる。
      注意： これでウイルスは5% sucrose中にあり、20 µL、50 µL、100 µL、または200 µLのアリコートに分注して-80 °Cで保存できる。あるいは、長期保存の場合は、セクション2.6に記載されているように、NDVを凍結乾燥させて4 °Cで保存できる。

結果

figure-results-1

図1：SPF（特定病原体不在）有精鶏卵へのNDV感染および回収。 (A) 9日間の培養後、胚の動きに加えて、網目状の血管（矢印）が確認できるはずである。「X」は絨毛尿膜と気室の境界を示しており、卵への接種のために穴を開ける箇所である。 (B) 死胎した胚の画像。網目状の血管が消失していることに注意すること。また、胚の動きも見られない。 (C) 有精鶏卵の構成要素の模式図。気室、卵黄嚢、羊膜嚢、絨毛尿膜、および尿膜液の位置を示している。 (D) 殻を除去し、絨毛尿膜を露出させる。 (E) 絨毛尿膜を切開した後の、尿膜液と胚の本来の状態を示す。略称：NDV = ニューカッスル病ウイルス。

figure-results-2

図2：デプスろ過に使用した装置の一般的な構成を示す概略図。圧力計がデプスフィルターの上流に設置されていることを確認してください。

figure-results-3

図3：異なる構成におけるタンジェンシャルフローろ過（TFF）装置。矢印は流体の流れの方向を示す。 (A) TFFカセットの組み立て方法の図解。 (B) 流体の精製および濃縮時に使用される「オープン」構成のTFFシステムの概略図。 (C) ウイルスや洗浄液の溶出時に使用される、システムから流体を溶出させる際のTFFセットアップの概略図。 (D) TFFシステムの洗浄時に使用される「クローズド」構成のTFFシステムの概略図。略語：TFF = タンジェンシャルフローろ過（Tangential flow filtration）。

figure-results-4

図4：TFFで濃縮したウイルスの密度勾配超遠心分離および透析。 (A) ヨジキサノール密度勾配の組成を示す概略図。(B) 精製過程でMLバッファーを用いて作製したウイルスの、超遠心分離後のウイルスバンドパターン。主なウイルス含有バンドを黒い楕円で示している。(C) 透析操作の終了時に、ヨジキサノール勾配を用いて調製したウイルス10 mLを充填した透析カセットの標準的なサイズ。略語：TFF = タンジェンシャルフローろ過、ML = マンニトール-リシン。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
1 mL スリップチップシリンジBD309659 
10 mL ルアーロックシリンジBD302995 
10% ポビドンヨード溶液LORIS109-08 
15 mL コニカルチューブThermo-Fisher14955240 
18G x 1 1/2 in 鈍針（フィルニードル）BD305180 
18G x 1 1/2 in プレシジョングライドニードルBD305196 
25 G x 5/8 in ニードルBD305122 
5 mL ルアーロックシリンジBD309646 
氷酢酸Thermo-FisherA38-212 
アガロースFroggabioA87-500G 
Alexa-Fluor 488 ヤギ抗マウス抗体InvitrogenA11001 
Allegra X-14 遠心機Beckman CoulterB08861 
過硫酸アンモニウムBioRad161-0700 
漂白剤 (5%)Thermo-Fisher36-102-0599 
幅広・非ギザ刃ピンセットThermo-Fisher09-753-50 
ブロモフェノールブルーSigma-Aldrich114405-25G 
Centramate カセットホルダーPALLCM018V 
ChemiDoc XRS+BioRad1708265 
Digital 1502 Sportsman 卵インキュベーターBerry Hill1502W 
D-マンニトールSigma-AldrichM4125-500G 
検卵器（エッグキャンドラー）Berry HillA46 
エタノール (70%)Thermo-FisherBP82031GAL 
雌ネジT字継手、ナイロン、1/8 in NPT(F)Cole-Parmer06349-50 
湿度管理キットBerry Hill3030 
ヨディキサノールSigma-AldrichD1556ヨディキサノールの 60% (w/v) 水溶液（滅菌済み）
L-リシンモノ塩酸塩Sigma-Aldrich62929-100G-F 
雄ネジ・雌ネジ ルアーロック 1/8 in national pipe thread, NPTCole-Parmer41507-44 
Masterflex L/S デジタルドライブCole-ParmerRK-07522-20デジタルディスプレイ付きペリスタルティックポンプ
Masterflex L/S プレシジョンチューブ用イージーロードポンプヘッドCole-ParmerRK-07514-10 
Masterflex シリコンチューブ (Platinum) L/S 16Cole-Parmer96420-16BioPharm プラチナ硬化シリコン
Omega Membrane LV Centramate カセット、100KPALLOS100T02 
Optima XE-90 超遠心機Beckman CoulterA94471 
PBS 10X 溶液Thermo-FisherBP399-20 
ポリエチレングリコール 平均 Mn 20,000Sigma-Aldrich81300-1KG 
Slide-a-lyzer 透析カセット (Extra Strength)、10,000 MWCO 0.5-3 mLThermo-Fisher66380 
水酸化ナトリウム (ペレット)Thermo-FisherS318-10 
SPF卵（特定病原体不在卵）CFIANA供給業者は地域により異なる
スクロースThermo-FisherS5-3 
Supracap 50 デプスフィルターPALLSC050V100P 
手術用剪刀（サージカルシザース）Thermo-Fisher08-951-5 
Sw41Ti ローターBeckman Coulter331362プロトコルのステップ 2.3.1, 2.3.6, 2.3.7 で使用
SX4750 ローターBeckman Coulter369702 
SxX4750 コニカル底チューブ用アダプターBeckman Coulter359472 
薄壁 Ultraclear 遠心チューブ (9/16 in x 3 1/2 in)Beckman Coulter344059 
チューブ用スクリュークランプPALL88216 
汎用圧力計Cole-Parmer68355-06 

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有精卵の尿膜液からのウイルスの精製
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