肝臓モデルへの導入 リン酸緩衝生理食塩水（PBS）を規定量加え、アデノ随伴ウイルス（AAV）ベクター溶液を、5 mlあたり2.7 x 10¹³ベクターゲノムの最終濃度に調整する。カニューレからチューブを取り外し、肝臓を培地回路から切り離す。門脈のカニューレに5 mlシリンジを接続し、AAVベクター溶液全量（5 ml）を注入する。 注：オプションとして、フェノールレッド（5 µg/ml）を添加することで、肝臓全体へのAAVベクター溶液の分布を確認できる。 ポンプを作動させずに1時間インキュベートする。流速を段階的に上げ、1.25 ml/minで10分間、2.5 ml/minで20分間、そして3.75 ml/minで30分間とする。再細胞化したラット肝臓を6日間培養する。 注：1日おきに培地の3分の1を新鮮な培地（50 ml）と交換する。培養液をサンプリングし、乳酸脱水素酵素活性、培地サンプルのpH、ならびにグルコースおよび乳酸濃度などの生理学的パラメータを測定する。 Hiller, T., 他ヒト肝細胞癌細胞株HepG2を用いて再構築された三次元肝臓モデルにおけるウイルスベクターの研究 J. Vis. Exp., (2016)
このビデオでは、ヒト化ラット肝臓スキャフォールドにおけるアデノ随伴ウイルス（AAV）を介した遺伝子導入について実演します。ベクターは、受容体介在性エンドサイトーシスを通じて、蛍光レポーターと遺伝子サイレンシングRNAをコードする外来遺伝子を肝細胞に導入します。このモデルは、灌流による3D肝組織システムにおける効率的な導入を可能にします。
