電子顕微鏡法 スライドでの一次同定後、上清培養液を電子顕微鏡で観察し、巨大ウイルスの存在を確認する。 グロー放電処理したグリッド上に、陽性サンプルを5 µl滴下する。室温で約20分間静置する。 グリッドを慎重に乾燥させ、1%モリブデン酸アンモニウム溶液を少量、10秒間滴下する。グリッドを5分間乾燥させる。 加速電圧20 keVで電子顕微鏡観察を行う。 グリッドをホルダーにセットし、ホルダーを顕微鏡内に導入する。対応するアイコンをクリックして、真空度の概況を確認する。バルブを閉じ、スポットサイズ5、倍率25,0倍で観察を開始する。 ImageJ、または撮影画面にある顕微鏡の計測ツールを用いて、巨大ウイルスのサイズを測定する。 注：カプシドサイズが約20 nmである場合、サンプルをFaustovirusグループに分類する。 Bou Khalil, J. Y., 他Vermamoeba vermiformisを用いた環境試料からの新規Faustovirus分離のための迅速な戦略。 J. Vis. Exp. (2016).
このビデオでは、透過型電子顕微鏡を用いて、感染したアメーバ培養液中のfaustovirus粒子のイメージングを実演します。グリッドの作製、コントラストを向上させるためのモリブデン酸アンモニウムによるネガティブ染色、および顕微鏡下でのウイルスの可視化について解説します。プロトコルの最後には、顕微鏡に統合されたソフトウェアツールを用いてfaustovirusのサイズを測定します。
