動物モデルを用いるすべての手順は、地域の機関動物ケア委員会およびJoVE獣医審査委員会の承認を受けています。 1. γHV68感染マウスにおけるELISAによるサイトカイン分泌能の測定 性別の揃った6～8週齢のC57BL/6（B6）同腹マウス（1群あたり8～12匹）に、ケタミン1.5 mgおよびキシラジン0.12 mgを腹腔内投与して麻酔をかけ、40 µlに懸濁した40 PFU（プラーク形成単位）のγHV68を経鼻接種します。感染後の異なる時点において、CO2吸入および頸椎脱臼によりマウスを安楽死させます。 胸骨に沿って左側方から切開して胸腔を開き、鋭い鋏で肋骨を切断します。肺組織を回収します。 肺組織の半分（左葉）を、1.0 mmのジルコニア/シリカビーズ500 µlを含む滅菌済みの1.5 mlスクリューキャップチューブに回収します。チューブに冷えた無血清DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）1 mlを加え、ビーズビーティングにより30秒間肺組織をホモジナイズします。チューブを氷上で2分間冷却し、この工程をもう一度繰り返します。 チューブを4 °Cで遠心分離（15,000 x gで10分間）し、上清を回収して、以下に述べる方法でサイトカイン産生量を測定します。 市販のサイトカインELISA（酵素結合免疫吸着法）キットを用い、製造元の指示に従ってサイトカインを測定します。 Zhang, J., 他 P. サイトカイン産生を回避するウイルスの天然免疫シグナルの解析 J. Vis. Exp. (2014)
このビデオでは、肺特異的な免疫反応を誘導するために、マウスにマウスヘルペスウイルスを経鼻投与する方法を実演します。その後、肺組織を処理してサイトカインを含む上清を回収し、宿主の免疫反応の下流評価を行います。
