このビデオでは、遺伝子組み換え E. coliにおけるバクテリオファージQβコートタンパク質の制御発現の方法を実演します。得られたタンパク質はウイルス様粒子へと自己組み立てされ、これらを回収して後続のバイオコンジュゲーションに使用します。
方法論記事
遺伝子組換えE. coliにおけるウイルス様粒子の作製
47 回視聴
⸱
2026年9月30日
この記事について
要約
プロトコル
Qβの発現
- ベンチエリアを1:1の漂白剤/エタノール溶液で拭く。
- 無菌環境下で、3 mLのSuper Optimal Broth (SOB) 培地にE. coli BL21(DE3)のシングルコロニーを添加し、3 mLのスターターカルチャーを2本作成する。
- 37 °C、相対湿度（rH）0%の室内のシェーカーを用い、250 rpmで一晩培養する。
- スターターカルチャーをSOB培地に接種する：
- 2本の3 mLスターターカルチャーをシェーカーから取り出し、無菌環境下で、それぞれ1 Lの新鮮なSOB培地が入った2本の2 Lバッフル付き三角フラスコに注ぐ。
- 接種した培地を37 °C、0% rHの室内のシェーカーに設置し、250 rpmで振盪させる。
- 37 °C、0% rHの室内のシェーカーを用い、250 rpmでOD600が0.9–1.0に達するまで細菌を培養する。
- P1000ピペットを用いて1 M isopropyl β-D-1 thiogalactopyranoside (IPTG)を1 mL添加し、タンパク質発現を誘導する。
- 培地を37 °C、0% rHの室内のシェーカーに残し、250 rpmで一晩振盪させる。
- 翌朝、培地をシェーカーから取り出し、1000 mLボトルを用いて4 °C、20,621 × gで1時間遠心分離し、細胞を回収する。
- 上清を廃棄し、細胞ペレットを回収する。
- 細菌を殺菌するため、上清を約5 mLの漂白剤が入ったフラスコに注ぐ。これは廃棄物となる。
- スパチュラを用いて遠心分離ボトルの底から細胞ペレットを掻き出し、50 mL遠心チューブに移す。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| LB Broth (Miller) | EMD Millipore | 1.10285.0500 | |
| トリプトーン（粉末） | Research Products International | T60060-1000.0 | |
| 酵母エキス（粉末） | Research Products International | Y20020-1000.0 | |
| 無水硫酸マグネシウム | P212121 | CI-06808-1KG | |
| 塩化ナトリウム (Crystalline/Certified ACS) | Fisher Scientific | S271-10 | |
| 塩化カリウム | Fisher Scientific | BP366-500 | |
| Elga PURELAB Flex 3 水精製システム | Fisher Scientific | 4474524 | |
| リン酸一カリウム | Fisher Scientific | BP362-1 | |
| リン酸二カリウム（無水） | Fisher Scientific | P288-500 | |
| Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside (IPTG) | Sigma Aldrich | I6758-1G | |
| Nalgene 遠心ボトル（キャップ付、ポリプロピレン共重合体） | Thermo Scientific | 3141-0250 | |
| VWR Os-500 オービタルシェーカー | VWR Scientifc Products | 14005-830 | |
| P1000 Pipetman | Gilson | F123602 | |
| Falcon 50 mL コニカル遠心チューブ | Fisher Scientific | 14-432-22 |
