透過電子顕微鏡（TEM）を用いたE型肝炎ウイルスナノ粒子（HEVNP）の観察 TEMイメージング用に、HEVNPサンプルを10 mM 2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸（MES）pH 6.2を用いて0.5～2 mg/mLに調製または希釈する。 親水性のカーボン表面を作るため、カーボンコートグリッドを40 mAのグロー放電で30秒間イオン化する。グロー放電装置については、材料表に記載されている。 注：グリッドの親水性カーボン表面の持続時間は、グロー放電処理後30分間のみである。 ピンセットで保持し、2 µLのHEVNPサンプルをグリッドに滴下し、15～30秒間待機した後、フィルターペーパーでブロットする。 直ちにグリッドをddH2Oで洗浄し、フィルターペーパーでブロットする。 直ちに2%酢酸ウラニル2 µLをグリッドに滴下し、15秒間待機した後、フィルターペーパーでブロットする。サンプルグリッドを電子除湿ドライキャビネットに入れ、一晩乾燥させる。 グリッドをTEMに導入し、10～80k倍の倍率で撮影する。HEVNPはウイルスRNAを欠いているため、TEMでは直径約27 nmの中空の正二十面体タンパク質として観察される。 Chen, C. C., 他 化学的結合法を用いたE型肝炎ウイルスナノ粒子（HEVNP）の表面機能化 J. Vis. Exp. (2018)
このビデオでは、透過電子顕微鏡で可視化するためのE型肝炎ウイルス様ナノ粒子の調製およびネガティブ染色法について解説します。本手法では、自己組織化したカプシドのみの粒子の構造的完全性を明らかにし、高解像度イメージングを通じてその均一性と純度を確認します。
