マウスの膀胱壁の注入は、同所膀胱の幹細胞と癌の生物学を研究するために有用なアプローチである。この繊細な顕微法は慎重に手法と実践を習得することができます。
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この記事について
サマリー
要約
マウスの膀胱壁の注入は、同所の幹細胞、平滑筋、および癌の生物学を含む膀胱の現象を研究するために便利なテクニックです。注射を開始する前に、外科領域は、石けんと水と消毒液で洗浄する必要があります。手術用機器は使用前に、各動物の間で滅菌する必要があります。各マウスは、吸入イソフルラン麻酔（誘導2-5％、メンテナンス1-3％）とハサミで正中腹部切開を行うことによって露出は膀胱の下に配置されます。膀胱がいっぱいになっている場合、それは2本の指で圧迫穏やかなことで、部分的に減圧される。興味の細胞懸濁液は、intramurally 29または30ゲージの注射針と1ccのまたはより小さいシリンジを使用して膀胱のドームの壁に注入されます。傷は、傷のクリップと温暖化のパッドに回復させたマウスを用いて閉じられます。膀胱壁の注入は、練習で習得することができる繊細な顕微技術です。
プロトコル
1。マウスの膀胱壁インジェクション
マウス系統、年齢、および性別の選択は、実験的なニーズによって決定されます。これは老化の前に免疫学的成熟度のウィンドウであるため、我々は、生後8〜12週間の間にマウスを使用してください。一般的なガイドラインとして、マウスはストレス誘発性の交絡因子を避けるために、実験操作の前に少なくとも一週間に到着してください。
- 石鹸と水で手術台の表面を清掃してください。
- 慈徳のワイプまたは消毒ワイプで手術台の表面を拭いてください。
- 手術に使用する前にきれいな手術器具をオートクレーブ。
- さらに、使用直前に熱いビーズ滅菌器で手術器具を殺菌するだけでなく、手術中に動物の間で。
- 最初の使用前と最終的な外科手術の最後に無水アルコールで繰り返し吸引と注射で100μLハミルトンシリンジと29または30ゲージ（1 / 2インチ長い）針を清掃してください。
- それぞれの動物の間でリン酸緩衝生理食塩水、滅菌とハミルトンシリンジを洗浄し、すすいでください。
- 2〜5パーセントの間にイソフルランセットを使用して、イソフルラン誘導チャンバ内にそれらを置くことによってマウスを麻酔。
- 全身麻酔が達成されると、正常な体温を維持するためにウォームなパッドの下で仰臥位での室と場所からマウスを取り外します。
- （適切な麻酔を維持するために、必要に応じて1〜3パーセントから滴定）イソフルラン気化を含むノズルで、動物の鼻を配置することにより、メンテナンスの麻酔を達成する。
- バリカンで腹部の皮膚を剃る。
- 手術中の糞便汚染を防ぐために、肛門をカバーするために使い捨て、滅菌外科用ドレープを使用してください。
- 手術野（下腹部）をカバーする2番目の使い捨て、滅菌外科用ドレープを使用してください。
- Betadineに浸したガーゼの3つの部分で準備腹部。このステップを3回繰り返します。
- 拡大のための解剖顕微鏡を使って、ハサミで下の正中腹部切開を行います。
- 膀胱を公開。
- 膀胱がいっぱいになっている場合、部分的にドームでの穏やかな下方圧力によってそれを解凍。
- 上を向いて針のベベルと膀胱のドーム（壁内注射）の壁に、29または30ゲージの注射針と注射器を用いて、試料溶液を（最大50μL）注入。
- 膀胱壁に試料溶液を注入する注射器のプランジャーを押してください。極めて限局したブレブは、膀胱壁への細胞の正常な注射の指示です。
- 、シリンジを取り外します創傷クリップで切開を閉じて、マウスが温暖化のパッドに回復することができます。
2。代表的な結果：
漏れ流体をしないとサイズで安定したまま極めて限局したブレブは、膀胱壁（図1）への細胞の成功注入の指示です。組織学的分析は、膀胱壁に注入された細胞の存在を確認するために実行することができます。
図1。説明のためにインドのインクを使用して成功した膀胱壁のインジェクションの例。
図2実験手順の模式図。
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ディスカッション
マウスの膀胱壁の注入は、膀胱壁の定義の領域に特定の細胞の移植が可能になります。この手法は、膀胱癌、平滑筋、および幹細胞生物学のマウスモデルのための広いアプリケーションを持っています。彼らの成長と分化を生理学的に関連する解剖学的文脈で検討することができるように定義することにより、マウスの膀胱壁の注入は、同所場所に膀胱癌や幹細胞の導入を促進する。実際には、Dinneyら。最初はヌードマウス1の同所性ヒト膀胱癌の異種移植片を研究するために、このテクニックを説明した。
膀胱壁の注入法は膀胱癌および幹細胞研究の1-9の番号に利用されていますが、それが使用される唯一の方法ではありません。多くの科学者は、皮下、腹腔内、または静脈注射によってヌードマウスに膀胱癌細胞を移植しようとしましたが、これらのモデルは、予測可能な腫瘍原性と11-13 in vivoでの細胞株での選択を可能に転移特性を示したいない。さらに、腫瘍細胞とマウス14の経尿道的接種に依存している膀胱癌モデルの数が...
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開示事項
利害の衝突は宣言されません。
謝辞
我々は感謝NIDDKからスタンフォード小児研究基金とK08DK087895 - 01からのパイロット助成金の支援を認める。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 試薬の名前 | 会社 | カタログ番号 | |
| イソフルラン（Aerrane） | バクスター | NDC 10019-773-60 | |
| 29または30ゲージの針 | ハミルトン | 7803から06または7803から07 | |
| 100マイクロリットルのシリンジ | ハミルトン | 7656〜01 |
参考文献
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