Method Article

頭蓋顔面の開発時には外胚葉上皮のシグナリング特性を評価する

DOI:

10.3791/2557

⸱

March 24th, 2011

 , 
1Department of Orthopaedic Surgery, University of California San Francisco

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この記事では、頭蓋顔面の開発中にシグナリングと表面頭部外胚葉のパターニング特性をテストするために設計された組織移植の手法を説明します。

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

鳥類胚のアクセシビリティは、実験的な発生学者が開発し、パターニングし、脊椎動物の形態形成（例えば、1、2、3、4）規制組織の相互作用の役割の間に細胞の運命を理解して支援してきました。ここで、我々は、顔の開発中に外胚葉組織のシグナリングとパターニング特性をテストするには、このアクセ​​シビリティを悪用する方法を示しています。これらの実験では、我々は、同じ地域やニワトリ胚の異所性の領域のいずれかの上にウズラやマウスからの上顎を覆う表面頭部外胚葉を移植することにより、ウズラ、ニワトリ5またはマウス-ひよこ6キメラを作成します。雛への移植のドナー組織としてのウズラの使用は、このように研究者がホストとドナーの組織7を区別できるように、ウズラの存在ではなく、ニワトリの細胞核マーカーを活用するために開発されました。私たちはマウスニワトリキメラ8のホストとドナーの組織を区別できるようになる、同様に、反復的な要素は、マウスのゲノムに存在し、遍在的に発現される。これは、私たちは様々な変異体胚に由来する外胚葉のシグナル伝達の特性をテストすることができますので、ドナーの組織としてのマウスの外胚葉の使用は大幅に、これらの組織の相互作用の理解を拡張します。

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1。ドナー組織の準備

  1. 培地を準備し、ガラスのピンをシャープに、タングステンの針を強めています。
  2. シェルから胚を回収、氷冷PBSで洗う。
    1. 10mLのシリンジと18ゲージの針を使用すると、卵の殻の先端からアルブミン1.0 mLを削除します。
    2. はさみのポイントを使用してシェルの上に小さな穴を確認し、胚を露出させる円形の開口部をカット
  3. DMEM（無血清、室温）に頭と場所を削除します。
  4. 胚（またはそのような上顎または下顎のプロセスなど、他のドナーサイト）からFrontonasalプロセスを細かく分析
  5. 20分氷上でPBSの2.4U / mLのディスパーゼのダイジェスト
  6. 消化を停止するには、1％BSAを含むDMEMでティッシュカバー
  7. 別の外胚葉、間充織、および神経外胚葉に尖ったタングステン針を使用して、
  8. ホストは、移植の準備ができるまで、氷上でDMEM、1％BSAで移植組織を保存する

2。ホストの準備

  1. 胚を公開
    1. 10mLのシリンジと18ゲージの針を使用すると、卵の殻の先端からアルブミン1.0 mLを削除します。
    2. はさみのポイントを使用してシェルの上に小さな穴をあけます。穴の....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この移植の方法を使用すると、私たちは外胚葉の背腹極性と上顎のproximodistal拡張を調節するシグナル伝達情報が含まれていることを決定することができました。ウズラやマウスの外胚葉、および多くの種6,11の間でこの組織の分子シグナルの保全を使用して結果の類似性は、これは脊椎動物間で高度に保存されたシグナル伝達の中心であることを示します。さらに、他の研究者らは、表面頭部外胚葉の異なる領域の信号特性をテストするために同様の技法を使用しているし、面12の形態形成に貢献する外胚葉に位置する複数のシグナル伝達の中心の存在を明らかにしました。このメソッドは、私たちは、異なる組織だけでなく、組織内の地域的な違いは、顔の開発時に果たす役割についての理解を促進することができます。最後に、鳥 - キメラシステムの強さとマウス遺伝学の強みを組み合わせることで我々は開発中の上皮 - 間葉相互作用の分子メディエーターを解明することができる、と我々はこれらの相互作用を調節するメカニズムを特定できるようになります開発。

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
利害の衝突は宣言されません。

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この作品は、R01 - DE018234とR01 - DE019638によって賄われていた。

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1x PBSテクトロニクス株式会社
DMEMカリフォルニア大学サンフランシスコCCFDA003
BSASigma-AldrichA7906
DispaseGIBCO, by Life Technologies17105-041
35x10 mm ペトリ皿ファルコン BD1008
No. 5 デュモン鉗子ファイン サイエンス ツール11252-20
はさみファインサイエンスツール14058-11
春はさみファインサイエンスツール15010-11
ニードルホルダーファインサイエンスツール26016-12
ニードルファインサイエンスツール26000
キャピラリーチューブドラモンドサイエンティフィック3-000-225-G
パスツールピペットフィッシャーサイエンティフィック13-678-6B
スプリングハサミファインサイエンスツール15010-11
ブレードホルダーファインサイエンスツール10052-11
カミソリブレードファインサイエンスツール10050-00
TEKZR114校 タングステンマイクロ

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Noden, D. M. The Role of the Neural Crest in Patterning of Avian Cranial Skeletal, Connective, and Muscle Tissues. Developmental Biology. 96, 144-144 (1983).
  2. Bronner-Fraser, M., Stern, C. Effects of Mesodermal Tissues on Avian Ne....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Craniofacial DevelopmentEctodermal EpitheliaQuail Chick ChimerasMouse Chick ChimerasTissue TransplantationUpper Jaw EctodermNucleolar MarkerBMP Seven ExpressionTrichrome StainingIn Situ Hybridization

Related Articles