細胞挙動を研究するための溝パターンを用いたマイクロ流体デバイス

マイクロ流体デバイスのA.の微細加工

1. 4インチSiウエハーは、活性酸素プラズマ（30W、Harrick科学、NYで5分）で処理される。
2. ネガ型フォトレジスト（SU - 8 2015、マイクロケム、MA）は、Siウエハ上に1分間900rpmでスピンコートです。
3. ウェハは、ソフトは95で焼成° Cのホットプレート上で6分とマイクロチャネルを含むマスク膜を介して4分間UVライト（200W）にさらされている。
4. ウェハは、95で焼成した後℃で6分間であり、SU - 8フォトレジストの現像剤を使用して開発されています。
5. マイクロチャネルを含むフォトレジストパターン付きウェーハは、ペトリ皿に配置されます。
6. ポリ（ジメチルシロキサン）（PDMS）（Sylgard 184）金型は、混合シリコーンエラストマーと硬化剤（10:1比）によって製造される。
7. PDMSの混合物は、Siマスターモールドに注ぎ、気泡を除去するため真空デシケーターに配置されます。
8. PDMSは、1〜2時間、70℃で硬化させる。
9. PDMSモールドは、その後のSiマスターモールドから剥離されています。

b.デバイスの組み立て

1. 40μmの厚さのトップ流体チャネルと40μm厚の底microgroovedチャンネル（25、50、75、および100μメートル、幅）は、二つの異なるSiのマスター金型から取得されます。
2. 流体デバイスのチャネル入口と出口がパンチされています。
3. 流体チャンネルとマイクログルーブのチャンネルが不可逆的に活性酸素をプラズマ（30W、Harrick科学、NYで5分）によって接合される。
4. 細胞外マトリックス（ECM）（すなわちフィブロネクチンは）インキュベーターで1時間（37℃）のためにマイクロ流体デバイスの内部にコーティングされています。

C.細胞播種と実験

1. NIH - 3T3マウス線維芽細胞は、10％ウシ胎児血清（FBS）を含むダ​​ルベッコ変法イーグル培地（DMEM）を用いて組織培養フラスコで培養されています。
2. 細胞はトリプシン処理し、解離する。
3. 解離細胞を3の細胞密度× 10 ⁶細胞/ ml（図1）におけるマイクログルーブのチャンネルにロードされます。
   
   
   図1
   
   
4. 2 mLのメディア、100mMのH ₂ O _2、およびアポトーシスアッセイ（20μLのアネキシンVと40μLヨウ化プロピジウム、Invitrogen社、カリフォルニア州）は、シリンジポンプ（1μL/分）を使用してチャネルに注入されています。
5. 細胞は倒立顕微鏡（ニコンTE 2000）を使用して監視し、リアルタイムです。

Cells were immobilized and patterned within microgrooved substrates in a microfluidic device. The apoptosis process of cells exposed to hydrogen peroxide was observed in real-time and analyzed by using Annexin V and propidium iodide. Thus, this microfluidic device containing microgroove channels could be useful for high-throughput drug screening.