プラットフォーム再配置を伴う水の迷路:ワーキングメモリを評価する方法

要約

出典:Hausser, N., et al. 外傷性脳損傷後のラットの行動障害の検出。J. Vis. Exp (2018).

このビデオでは、ネズミのワーキングメモリを研究するために使用されるナビゲーションタスクであるプラットフォーム再配置を使用したモリス水迷路テストについて説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ワーキングメモリ 水の迷路

1. 備品
   1. 28 cmの高さまで水で満たされ、26 ± 1°Cに維持されたタンクを使用します。
   2. 高さ26cmのスタンドに直径10cmの透明なアクリルガラスの台座を使用します
      手記：プラットフォームの上面は、Xが交差する円の形をしたシリコンでコーティングする必要があります。これにより、ネズミはプラットフォームに登ることができ、滑り落ちないように牽引力を得ることができます。
   3. ストップウォッチ、ヒートランプ、使い捨てタオル、吸収パッド、予備のケージ、小さくて柄の長い水槽用魚網を集めます。ビデオカメラに接続されたコンピューター化されたビデオ追跡システムを使用して、ラットが泳いでいる様子を記録し、データをコンピューターに送信します。後で分析するために、ビデオとデータをコンピューターに保存します。
2. ワーキングメモリ水迷路テスト
   1. ラットに5日間連続して毎日4組の試行を与え、プラットフォームを4つの象限のそれぞれに配置し、以下に説明するように4つの開始点(N、S、E、W)のそれぞれからラットを開始します。
   2. まず、実験全体で使用する開始位置とプラットフォームのペアを定義します。
      注:プラットフォームが配置されている象限の順序と使用される開始点は、5日間の水泳ごとに異なる順序である必要がありますが、各ラットで同じです。
      1. 4つの開始点(N、S、E、またはW)と4つのプラットフォーム位置(象限1、2、3、または4)を使用します。図1)。たとえば、(N, 2;E、4;S、1;勝、3;図 1 を参照してください。出発点がプラットフォームに近すぎるのを避けるために、バランスの取れた順序 (ランダムではない) を計画します (プラットフォームの位置と同じ象限に開始点はありません)。プラットフォームの象限と 4 つの開始点を使用してデータシートを設定します。
      2. ラットの泳ぎをビデオに撮り、指定されたデータ(泳ぐ時間、速度、プラットフォームを見つけるまでの移動距離など)を収集するために使用するビデオ追跡ソフトウェアのプロトコルを記述します。
         手記： 追跡ソフトウェアは、指定された時間が経過すると自動的に録音を停止します。プロトコルでは、プラットフォームがどこに配置されるか、動物ごとに何回の試行を実行するか、セッションごとに何匹の動物がテストされるか、および許容される最大期間(たとえば、120秒)を指定できるようにする必要があります。
      3. セッションごとに4〜6匹のラットをテストします.
         手記： 6匹以上のラットは、ラット間のタイミングに問題を引き起こし、ハンドラーによるエラーにつながる可能性があります。ウォーミングボックスも混雑します。
   3. トライアル 1
      1. ビデオ追跡ソフトウェアを開き、水の迷路マップを含む正しいプロトコルをロードします。
      2. プラットフォームを割り当てられた場所(例:2;図1)をクリックし、ソフトウェアのマップと一致することを確認します。ラットがフィールドに入ったときに開始するように追跡ソフトウェアを準備します view ビデオカメラの。
      3. ラットを割り当てられた場所(例:N;図1)そしてすぐにタイマーを開始します。
      4. ラットがプラットフォームを見つけるのを120秒待ちます。ネズミがプラットフォームを見つけたら、タイマーを停止し、ワークシートに時間を記録します。ラットがプラットフォームを見つけられなかった場合は、手でプラットフォームに導き、120秒を記録します。ラットを15秒プラットフォームに残します。
   4. トライアル 2
      1. ソフトウェアが試用版 2 の準備ができていることを確認します。ラットを同じ開始位置(N)のタンクに戻します。手順1.2.3.4を繰り返します。
   5. 試行2の後、ラットを加熱された囲いに4分間置き、プラットフォームを2番目の場所(4;図1)、ソフトウェアのマップと一致することを確認します。
   6. 試行 1 と 2 の手順 (手順 1.2.3 から 1.2.4) を繰り返して、4 つの開始位置/プラットフォームの組み合わせがすべて完了するようにします。

結果

図 1.水の迷路の図。この図は、ワーキングメモリMorris水迷路の可能なプラットフォーム位置(1、2、3、4)と開始点(N、S、E、W)を示しています。ラットは、各開始場所/プラットフォームのペアから2回の試行が許可されます。試行のペアの間には 15 秒の試行間隔と 4 分間の保温チャンバーでの休憩があり、毎日のセッションごとに合計 4 組の試行が行われます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Sprague-Dawleyラット	チャールズリバーズ研究所	CD-IGSラットの系統コード001	男性アルビノ 到着時300-350g
グラスファイバープール	メーカー不明		直径 72 インチ x 深さ 30 インチ (~ 500 ガロン)
プレキシガラスプラットフォーム	マギー・パセリによる手作り		直径10cm、高さ26インチ、プラットフォームの表面にシリコンを塗布してグリップ面を提供
プレキシガラスの動物箱 ふた付き	UTMBマシンショップ		2箱10 "w x 16" L x 9 "h
スポットライト/ヒートランプ	ホームデポ		3 プールの周り 2 箱以上 動物を乾燥させる
AnyMaze	サンディエゴ・インスツルメンツ	9001	http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/

名