マウスヘッドポスト移植:げっ歯類の頭部固定法

要約

出典:França de Barros, F., et al. -Long-term Sensory Conflict in Freely Behaving Mice.J. Vis. Exp.(2019年)。

このビデオは、マウスモデルでのヘッドポスト移植手術を示しています。ヘッドポストは、実験中にマウスを頭部固定して拘束するだけでなく、自由に動く動物にヘッドデバイスをしっかりと取り付けるために使用されます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. ヘッドポスト移植手術

>注:滅菌器具の使用を確認し、さまざまなゾーンで手術と回復を手配してください。マスターすると、移植手順は約30分続きます。

1. 鎮痛のために、手術開始の30分前に、ブプレノルフィン(0.05 mg / kg)を皮下注射し、動物を自宅のケージに戻します
   手記：ブプレノルフィンの鎮痛効果は、手順の終了後も約12時間持続します。.私たちの経験では、マウスはこの介入に関連する苦痛の兆候を示していませんが、手術の 24 時間後に 0.05 mg/kg ブプレノルフィンを投与することをお勧めします。
2. 2.5%〜3%のイソフルランガスが入ったチャンバーで動物を麻酔します。3分間待ってから、マウスが適切に麻酔されているかどうか、チャンバー内の呼吸と動きの欠如を観察して確認します。マウスをヒーティングパッド付きの手術台上のノーズコーンに通し、指間つまみにより、離脱反射がないことを確認し、イソフルランを1.5%に下げます。
3. 電気カミソリを使用してマウスの頭を剃ります。無菌環境を得るには、剃った部分をヨウ素溶液でこすり、その後70%アルコールでこすります。この手順をさらに 2 回繰り返します。
4. 局所麻酔のために頭の皮下に塩酸リドカイン(2%、2 mg / kg)を注入し、効果が始まるまで5分待ちます。.乾燥による眼の損傷を避けるために、マウスの目を局所眼科用獣医軟膏で覆います。.
5. 鈍い鉗子で後頭部の皮膚をつかみ、鈍いハサミ(またはメス)で縦に約1.5cm切開して頭蓋骨を露出させます。
6. メスの助けを借りて、骨膜を引っ掻きます。頭蓋骨がわずかに出血し始めると、ヘッドポストの固定が損なわれる可能性があるため、強く引っ掻きすぎないように注意してください。
7. 頭蓋骨の中央に緑色の活性剤(材料の表を参照)を一滴垂らします。これにより、骨透過性が増加することにより、セメントの固定が改善されます。
8. セメントを準備します:ポリマーのスプーン1杯(材料の表を参照)を5滴のモノマーと1滴の触媒と混合します。ブラシの助けを借りて、ラムダとブレグマの頭蓋骨のランドマークの間にセメント混合物をたっぷりと塗ります。
9. ラムダからブレグマに向かってスワイプする動きで、ヘッドポストをセメントにすばやく置きます。ヘッドポストを配置した後、ヘッドポストが頭蓋骨に適切にくっつくように、下部の周りにさらにセメントを塗り直します。適切な固定を保証するために、セメントが豊富に塗布され、次のステップに進む前に乾燥することを確認してください
   手記：この固定手順では、ヘッドポストが外れず、長期間の繰り返しテストが可能になります。私たちの手では、ヘッドポストの取り外しは<10%です。
10. 樹脂混合物を調製するには、混合物の滑らかな一貫性を可能にする粉末と液体の比率を適用します。セメントを塗布した場所とヘッドポストの周囲に樹脂を塗布して、表面を保護します。
11. 樹脂が乾くまで3分待ち、モノフィラメント縫合糸で耳の後ろの皮膚を閉じます。綿棒を使用して、希釈した(10%〜20%)ヨウ素溶液を手術部位に塗布します.
    手記：レジンに皮膚がくっつかないように注意してください。
12. 麻酔をオフにし、低体温を避けるために動物を赤い暖かい光の下に置きます。湿らせた食品とヒドロゲル、またはゲルをベースにした別の水源をケージの床に置きます。マウスが意識を取り戻すまで、マウスを放置しないでください。動物が処置から完全に回復したらすぐに(通常は30分から1時間後)、社会的相互作用を刺激するために、3人または4人のグループでケージに入れます。

材料

14079-10

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
鈍いハサミ	FSTの
触媒V	サンメディカル、日本	LX22	Parkell バイオマテリアル、キット n°S380
デンタロンプラス	ヘレウス	37041
グリーンアクティベーター	サンメディカル、日本	VE-1	Parkell バイオマテリアル、キット n°S380
モノマー	サンメディカル、日本	MF-1	Parkell バイオマテリアル、キット n°S380
オクリゲル	TvmLabの	10779	眼球獣医軟膏
ポリマーL型クリアー(セメント)	サンメディカル、日本	TT12Fの	Parkell バイオマテリアル、キット n°S380

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