細胞の腹腔内注入:マウスモデルの腹膜脂肪組織にがん細胞を送達する方法

要約

出典: Krishnan, V. et al. 腹膜脂肪における乳白色スポット構造の卵巣がん転移性コロニー形成を研究するためのアプローチ。 (2015年)

この動画では、腹膜脂肪組織における卵巣がん細胞のコロニー形成とその後の転移について研究するために、マウスモデルで卵巣がん細胞懸濁液の腹腔内注射を行います。

プロトコル

動物が関わるすべての手続きは、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 細胞の腹腔内注射

>注:私たちの実験では、病原体への曝露のリスクを制限するために、マウスはバリア施設内の層流またはバイオセーフティキャビネットで取り扱われます。この技術を明確に示すために、添付のビデオの手順は、動物実験が承認された実験室で行われました。この特定の技術は、動物が麻酔下にある必要はありません。承認されたプロトコルの下で、生きた動物でこの技術を実行します。この研究には適切なマウス系統を使用してください。例えば、ヒト卵巣がん細胞(SKOV3ip.1およびHeyA8)のコロニー形成の研究に、免疫不全の無媚なヌードマウスを使用する。免疫適格なC57BL/6マウスをマウス卵巣がん細胞(ID8)のコロニー形成の研究に使用します。

1. 卵巣がん細胞のシングルセル懸濁液500μlをシリンジにロードし、滅菌キャップ付きの25G針に入れます。これにより、注入前の細胞のせん断が減少します。
2. マウスの首筋を掴み、手のひらと人差し指で尻尾を持ち、左後ろ足を薬指と小指で固定します(マウスを左手で拘束している場合)
   注:腹部臓器に外傷を与えないように、注射中にマウスが動かないようにマウスをしっかりと拘束してください。
3. 膝のすぐ上の腹部を横切る線を想像し、動物の右側と正中線の近くに点を見つけます。エントリポイントは頭蓋から最後の乳首のわずかに内側にあります.
   手記：マウスの右側に針を差し込むことで、盲腸を避け、腸に穴を開けるリスクを減らすことができます。
4. マウスの腹部下部の外側領域に針を約0.5cmの深さまで挿入し、プランジャーを引き戻して、針が血管や他の腹膜臓器を貫通していないことを確認します。
   1. 液体が吸引されている場合は、シリンジ(およびサンプル)を廃棄してください。緑がかった茶色または黄色の吸引液は、それぞれ腸または膀胱への針の貫通を示します。
5. ゆっくりと安定した圧力でサンプルを注入します。針を引き抜き、マウスをケージに戻します。鋭利な容器に廃棄する前に、シリンジをキャップしないでください。
6. 注射後の特定の時点での_CO2窒息および重要な臓器摘出によりマウスを犠牲にします。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
DMEM	コーニング	10-013-履歴書
PBSの	コーニング	21-040-履歴書	カルシウムとマグネシウムなし
26ゲージニードル	BDの	329652