腹膜脂肪貯蔵所の採取:マウスモデルにおける腹膜脂肪組織の卵巣癌コロニー形成を研究する技術

要約

出典: Krishnan, V. et al. In Vivo and Ex Vivo Approaches to Study Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Milky Spot Structures in Peritoneal Adipose. J. Vis. Exp. (2015)

このビデオでは、卵巣がんを患う安楽死させた雌マウスモデルを使用しています。次に、転移性がん細胞のコロニー形成を研究するために、5つの主要な腹膜器官に関連する脂肪デポーまたは脂肪組織を特定して抽出するためのプロトコルについて説明します。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 実験研究のための動物の準備

1. 動物が新しい住居や環境に順応し、輸送や取り扱いの潜在的な生理学的影響から回復できるようにします。
   手記：以下の技術は、市販されている全てのマウス系統に適用可能である。実験に使用する動物の数は、研究デザインによって異なるため、統計学者の相談を受けて行う必要があります。

2. 腹膜脂肪貯蔵所の同定と分離

1. CO₂の過剰摂取と、死亡を確認するための二次的な物理的方法によって動物を安楽死させます。
2. 腹膜脂肪貯蔵所の採取は内臓摘出(二次法)を構成するため、腹膜壁を介して鼠径乳頭の近くに正中線切開を行い、内臓を露出させます(図1A)。
3. 大網脂肪(OM)の場合は、鉗子で腹腔から脾臓を伸ばすことにより、大網/膵臓複合体を露出させます(図1C)。すべての組織接続を綿密にトリミングすることにより、膵臓と脾臓から大網を放出します。残っている膵臓組織が切除されていることを確認してください。
4. 性腺脂肪(GF)の場合、鉗子を使用して卵巣を囲む性腺脂肪を持ち上げ、組織の接続部を切断して切除します(図1A右上)。
5. 子宮脂肪(UF)の場合は、鉗子を使用して子宮角を囲む子宮脂肪を持ち上げ、組織接続を切断して切除します(図1A右下)。
6. 腸間膜脂肪(MF)の場合は、小腸と幽門の間の接合部を切断します。鉗子を使用して小腸の自由端をしっかりとつかみ、腸間膜脂肪からゆっくりと「剥がす」ことができます。解剖ハサミを使用して腸間膜根から腸間膜脂肪を放出します(左下の図1A)。
7. 脾門脂肪(SF)の場合、鉗子を使用して脾臓の遠位端を持ち上げ、脾臓の門を膵臓に接続する組織の細い脂肪帯を露出させます。最初に膵臓から放出し、次に脾臓から慎重に解剖することにより、脾門脂肪を切除します(図1B)。

結果

図1.主要な腹膜脂肪貯蔵所の相対的な位置と構造。(ア)腹膜脂肪の5つの主要な供給源のうち4つの相対的な位置を示す肉眼的解剖学的解剖。大網(OM;輪郭)、性腺脂肪(GF)、子宮脂肪(UF)、腸間膜(MY)、卵巣(ov)、子宮角(uh)、および小腸(si)が示されている。(B)鉗子で脾臓を持ち上げることにより露出した脾門脂肪(SP;輪郭が示されている)。(C)マウスの大網を膵臓から解放して可視化を改善している。 (D)切除された腹膜脂肪の相対的なサイズと構造。(E)乳白色の斑点の存在に対する腹膜脂肪の組織学的評価 - (A)脂肪細胞、(MS)乳白色の斑点。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
解剖ツール	ファインサイエンスツール	NAの
PBSの	コーニング	21-040-履歴書	カルシウムとマグネシウムなし