バイオバンキングのための前立腺癌組織のサンプリング:新鮮な腫瘍組織から生検パンチを除去するためのMRIガイド下標的技術

要約

出典: Heavey, S. et al. 前立腺がんバイオバンキングのサンプリング手順をガイドするための磁気共鳴画像法および生検データの使用。 (2019年)

このビデオは、前立腺組織の特定の腫瘍含有領域をサンプリングするためのMRIデータに基づく手法を示しています。収集された生検標本は、バイオバンキング目的で保存することも、その後の下流分析に使用することもできます。

プロトコル

人間の福祉に関する制度的、国内的、国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査されています。

1. 前立腺スライシング装置

1. 前立腺スライシング装置(材料表)を購入します。または、3Dプリンターを使用してブレードハンドルを印刷します。

2. 腫瘍の標的化

1. 臨床ノートを確認して、診断生検で示される指標病変(左後部など)を特定します。
2. MRI画像を確認して、上記の腫瘍の位置を測定します。
   1. 腫瘍が軸面で最も目立つ配列を見つけます(例:T2強調)。
   2. 軸方向の画像をスクロールして、腫瘍が最大の画像を見つけ、参照用に画像を印刷します。
   3. 対応する冠状画像で、前立腺の基部から選択した軸方向の位置までの距離と、頂点から基部までの前立腺の全長(mm)を測定し、参照用に印刷します。

3. 前立腺の採取

1. 患者のノートをチェックして、この手順および下流の研究アプリケーションについて適切なインフォームドコンセントが得られていることを確認してください。
2. 根治的前立腺全摘除術の後、前立腺をドライポットに集めます。ホルマリンやその他の固定剤が前立腺に追加されていないことを確認してください。
3. サンプリングに適した無菌場所(病理検査室の層流フードなど)に移します。
4. 新鮮な組織が必要な場合は、できるだけ早くサンプリングに進んでください.
   注:特定のアプリケーション(例えば、RNAほど速く分解しないDNAの評価)では、検体を冷蔵して翌日にサンプルを採取することが適切な場合があります。

4. 試料作製

1. 層流フードと前立腺スライス装置は、滅菌技術を使用して、地域の除染手順に従って準備します。ここでは、70%エタノールをスプレーし、すべての表面を拭きます。滅菌済みの使い捨て針とメスを使用してください。スライサーブレードを最大3回使用します。使用後は毎回熱い石鹸水で洗い、70%エタノールをスプレーして拭いてください。
2. 標準的な目盛りを使用して前立腺(g)を計量します。
3. 前立腺にインクを塗ります。左側を青インクで、右側を黒インクでペイントします。カプセル全体と精嚢をインクで覆い、後で外科的マージンを示します。
   注:インクの手順は地域によって異なる場合があり、それに応じて変更できます。

>5. 前立腺スライス

1. 壁をスタンドのベースに垂直に挿入して、スライス装置を組み立てます(図1A)。
2. 前立腺を、基部と頂点が反対側の壁を向くように、後側を下にして前立腺を上にして配置します。前立腺の周りに金のピンを置きます。必要に応じて前立腺を少し内側に押してぴったりとフィットさせ、スライス中に前立腺をサポートします。
3. 定規を使用して基部から頂点までの前立腺の長さを測定し、MRIで測定した前立腺の長さと比較します。前立腺が縮小している場合は、ベースからターゲット横スライスまでの予想距離にアドホック補正を適用します。たとえば、MRI画像の前立腺の全長が50 mmであるが、この時点で定規で測定すると、前立腺が45 mmに縮小したことが示されている場合は、予想されるスライス位置を10%減らします。
4. ベースから目的の横スライスまで測定します。この測定値に最も近いピンを選択してスライスします。
5. 怪我を防ぐためにチェーンメイル手袋を着用し、スライス装置(図1B)を持ち、特定されたピンの両側にブレードを置き、スペーサーを使用してブレードを5mm離します。長いストロークでブレードを下、前、後ろにゆっくりとしっかりと動かしてスライスします(図1C)。装置を分解する前に、スライス全体が分離されていることを確認してください。
6. 壁とピンを取り外し、手袋を使用してスライスを滅菌済みのコルクボードシートに慎重に取り出します。

6. 組織サンプリング

1. 横スライスを目視検査し、軸方向のMRI画像と比較します。場合によっては、腫瘍領域が周囲の組織よりも薄く見えることがあります。
2. 横方向のスライスを優しく触診します。場合によっては、腫瘍が周囲の組織よりも硬く感じることがあります。
3. 軸方向MRI画像をガイドとして使用して、サンプリングする領域を1つ以上選択します。
4. 組織の目的の領域の生検パンチを取ります。
   1. 6mmのパンチを使用して、組織の目的の領域を押し下げます。
   2. ティッシュパンチをその場でコルクに押し付けてひねり、完全に分離し、必要に応じて鋭利なメスを使用して分離します。
   3. パンチを取り外し、必要に応じてプランジャーを使用して射出することにより、チューブ/金型に配置します。
   4. 必要に応じて、別の滅菌生検パンチを使用して、さらに腫瘍および良性サンプルについても繰り返します。パンチが打たれた穴に赤でインクを塗ります。
   5. 各パンチの位置、前立腺の重量、および組織の色/硬さに関する観察に注意してください。

結果

図1:前立腺スライシング装置。(A)壁はベースに対して垂直に挿入され、金のピンは前立腺(写真にない前立腺)を囲むベースに挿入されます。(B)交換可能な平行ブレードはブレードハンドルに挿入されます。(C)ブレードは、前立腺の5mmの部分をスライスするために金のピンの間を通過し

ます

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
6mm生検パンチ	フィッシャーサイエンティフィック	13404607	6mmの組織サンプルを採取するための使い捨て生検パンチ
ブラックインク	ライカバイオシステムズ	3801753	ティッシュマーキング&マージン染料
ブルーインク	ライカバイオシステムズ	3801751	ティッシュマーキング&マージン染料
チェーンメイルハンドグローブ	アルコ	1456803	スライス時に手を保護するためのチェーンメイルグローブ
コルクボード	フィッシャーサイエンティフィック	12396447	前立腺を次のサンプリング手順に固定するためのコルクボード
針	SLS(科学研究所用品)	SYR6112	サンプリング後に組織をコルクボードに固定するために使用する滅菌針
前立腺スライスアパラタス	Insitute of Cancer Research(ロンドン	NA - MTAの下で取得する必要があります	スライサーハンドル、ブレード、スペーサー、ベース、壁、ピンが入ったキット

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