マウス泌尿生殖器系からの前立腺の抽出:雄マウスの他の泌尿器系および生殖器系器官から前立腺を分離する技術

動物が関わるすべての手続きは、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 泌尿生殖器系(UGS)の解剖

>注: 図1に概略図を示します。

1. 生後3ヶ月の雄C57BL/6マウスをCO₂吸入安楽死法または他の承認された技術を用いて安楽死させる
   手記：生後3ヶ月から12ヶ月までのマウスを実験にうまく使用することができます。高齢のマウス(>6か月)は、UGSの周囲により多くの脂肪を持っている可能性が高く、これをクリアする必要があります。葉の同定と分離は、3か月未満のマウスではしばしば困難です。他の菌株も実験に使用できます。
2. マウスを仰向けに置き、動物の腹側が露出するようにピンを使用して脚を固定します。
3. マウスの腹部に70%エタノールをスプレーし、きれいに拭きます.
   手記：解剖前に腹部の毛を剃る必要はありません。
4. 中程度の鈍い鉗子のペアで、筋肉層と一緒に腹部から皮膚を持ち上げ、はさみを使用して腹部に逆Y字型の切開を行います。
   1. まず、陰茎のすぐ上から胸骨まで鋭利なハサミでまっすぐに切開します(図2a)。
   2. 切開部の付け根から各つま先に向かって、太ももまで切り取ります(図2b)。皮膚の両側と下部を折り返して、腹部全体を表示します(図2c-e).
      手記：カットサイズは、マウスの年齢とサイズによって異なります。最初の直線切開のサイズは、マウスのサイズに応じて、1.5〜4cmの範囲であり得る。
5. 他の臓器の上に移動して、UGSを露出させます。茶色がかった黄色の腸を持ち上げて動かします(図2f)。鉗子で腹部の脂肪パッド(不透明な白い海綿状組織)を拾い上げ、それらを側面に移動します(図2g).
   手記：UGSは、精嚢、尿道、前立腺、精管(輸精管)、および膀胱で構成されています。これは、不透明な白い半円形のアーチ(精嚢)の特徴的なペアと、液体で満たされた膀胱嚢が基部に付着していることで識別できます。精嚢の真下にある半透明の組織が前立腺です。
6. UGSの位置を特定し、鈍い鉗子で膀胱をしっかりと保持し、マウスの腹部からUGS全体を上に持ち上げます。
   手記：膀胱がいっぱいになっている場合は、最初に小さな注射器で膀胱を排出して、鉗子のグリップを改善し、膀胱が破裂するリスクを減らします。
7. 膀胱を引き上げ続け、はさみを膀胱の下にスライドさせ、前立腺を脊椎まで滑り込ませ、切り込みを入れます。腹腔への残りの接続部を切断します(図2hおよび2i)。誤って前立腺組織を切断しないように、UGSに近づきすぎないように注意してください。
   手記：UGSの下にカットを行うときは、ハサミをマウスの背面まで挿入して、カットが脊柱にもスナップするようにする必要があります。この方法により、UGSと腹腔との間のほぼすべての接続を1回の切片で切断し、マウスから組織を抽出するのに必要な時間を短縮します。
8. UGSを取り外し、6cmのペトリ皿(図2jおよび2k)でリン酸緩衝生理食塩水(PBS)またはダルベッコの改変イーグル培地(DMEM、高グルコース)の2〜6 mL(組織を覆うのに十分)に入れ、解剖顕微鏡(10倍倍)に移動します
   手記：残りの手順で必要に応じて、解剖メディアを交換します。

図1: マウス泌尿生殖器系の解剖と前立腺の分離を示す概略フローチャート。セクション 1 で説明するプロトコル手順のフローチャート

図2:マウスUGSの解剖。生後3か月のマウスからのUGSの解剖からの段階的な画像:(aおよびb)切開を行い、(c-e)皮膚を引き戻して腹部を露出させ、(f)腸を移動させる、(g)腹部の脂肪パッドを動かす、(hおよびi)腹腔からUGSを抽出する、(j)抽出したUGSを、(k)抽出されたUGSは、次のようにマークされたさまざまな臓器と組織を備えています:SV(黄色)=精嚢;P(赤)=前立腺;F(紫)=脂肪;V(水色)= 輸精管;およびB(緑)=膀胱。