がん細胞の前立腺内注射:同所性前立腺がんモデルを確立するためのがん細胞送達技術

要約

出典:Anker, J. F. et al. Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer. J. Vis. Exp. (2018)

このビデオでは、前立腺がん細胞の前立腺内注射をマウスモデルに投与する手順を実演します。同所性マウスモデルは、非侵襲的で臨床的に関連性のある環境で、疾患の原因と治療療法に対する反応を研究するために使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

>1. 術前のマウスの準備

>注:適切な適応を可能にし、動物のストレスを最小限に抑えるために、手術の少なくとも1週間前に大学の動物施設にハツカネズミを配置してください。ステップ1.1-1.6は、外科医の助手が行います。その後のすべての外科的ステップは、滅菌手袋と滅菌技術を備えた手術器具を使用して外科医によって行われます。

1. イソフルランでマウスを麻酔します(チャンバーを介した誘導の場合は2〜5%、ノーズコーンを介したメンテナンスの場合は1〜3%)。つま先のピンチ反射の喪失による完全な誘導を確認します。
2. マウスの体重を量り、少なくとも 0.05 mg/kg の鎮痛剤ブプレノルフィン s.c.
   を投与します。 手記： マウスの体重≥20 gは、前立腺内注射を成功させるのに理想的です。
3. 角膜の乾燥を防ぐために、両目に眼科用軟膏の潤滑剤を塗布します。
4. 腹部からすべての毛を剃ります。
5. 滅....

結果

図 1:前立腺葉、リンパ節の排出、および前立腺細胞内注射の代表的な技術。(A)右前立腺前立腺葉(黒、*)、付着した右精嚢(白)、右睾丸と脂肪パッド(緑)、膀胱(黄色)、(B)両側前立腺ドレイン傍大動脈リンパ節(オレンジ)、(C)マイクロ解剖ハサミ、Graefe鉗子、Graefe組織鉗子、縫合カッター付きニードルホルダー、28ゲージ針付き50μLシリンジ(左から右)、 (D)正中線切開、(E)精嚢および前立腺葉の外部化、(F)前立腺内注射、および(G)前立腺葉の充血。

....

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Myc-CaP細胞株	ATCCの	CRL-3255	使用前にマイコプラズマフリーであることを確認してください
マイクロ解剖ハサミ	ロボズ	RS-5910
グレージ鉗子	ロボズ	RS-5135
Graefe組織鉗子	ロボズ	RS-5150
Olsen-Hegar ニードルホルダー with 縫合カッター	FSTの	12002年12月
50 μL シリンジ 705 RN SYR	ハミルトン	〒7637-01	エチレンオキシドガスによる滅菌
28ゲージニードルスモールハブRNH	ハミルトン	7803から02	ポイントスタイル4、角度45°、長さ0.75インチエチレンオキシドガスによる滅菌
RPMI(ルプミ)	ギブコ	18875-093
FBSの	ギブコ	〒10437-028
ペンシルリン/ストレプトマイシン	ギブコ	15140-122
PBSの	ギブコ	14190-144
マトリゲル基底膜 マトリックス、フェノールレッドフリー、LDEVフリー	コーニング	356237	氷上で4°Cで一晩解凍 使用する前に
イソフルラン	ヘンリー・シャイン	〒11695-0500-2	ノースウェスタン大学比較医学センター(CCM)から取得
水塩化ブプレノルフィン 0.3 mg/mL		12496-0757-5	規制物質、後天性 ノースウェスタン大学CCMから
26 5/8ゲージシリンジ	BDの	309597	メロキシカムとブプレノルフィン注射用
眼科用軟膏潤滑剤	アクロン	17478-162-35
ベタジン外科用スクラブ(ポビドネヨージン、7.5%)	パデュー製品	67618-151-16
滅菌非粘着性パッド	ムーアメディカル	10775
滅菌アルコールワイプ	フィッシャーサイエンティフィック	22-363-750
手術顕微鏡 Stemi DV4	ツァイス
滅菌ポリエステルチップ付きアプリケーター	ピューリタン	25-806 1PD
5-0ビクリル吸収性逆切断針縫合糸	e縫合糸	J493Gの
4-0ナイロンモンフィラメント非吸収性逆切断針縫合糸	e縫合糸	699H
ガラスビーズ滅菌器	ファインサイエンスツール	18000-45
滅菌生理食塩水0.9%塩化ナトリウム	ホスピーラ	0409-4888-02

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