腎カプセル腫瘍異種移植:前立腺発がんを評価するための実験動物モデルを生成する技術

要約

出典:Nicholson, T. M. et al.前立腺発がんおよび良性前立腺肥大症の評価のための腎カプセル異種移植および皮下ペレット移植。J. Vis. Exp.(2013年)

このビデオでは、免疫不全のレシピエントマウスの腎カプセルにヒト由来の前立腺癌組織移植片を移植する様子を実演しています。この技術は、腫瘍の進行を評価し、新しい治療戦略を開発するために使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 外科的処置:腎カプセル異種移植

1. 麻酔導入の前に、マウスを観察して健康と幸福を確認してください。
2. マウスをチャンバーに入れて、イソフルラン麻酔を3〜5%で導入します。動物が動きを止めて呼吸数が減少した場合は、腹臥位でノーズコーンに移し、麻酔を1〜3%に保ちます。
3. 必要に応じて、バリカンを使用してマウスの背面を剃ります。これは、athymic nude (nu/nu) マウスを利用する場合は必要ありません。
4. 伸ばした後足のウェビングにしっかりと圧力をかけ、麻酔の適切性を評価します。マウスが圧力に反応すると、麻酔が効くまでにさらに時間が必要です。必要に応じて、麻酔の流れをわずかに調整して、適切な麻酔を実現します。
5. マウスに十分な麻酔がかけられたら、手術部位を外科用ヨウ素(ベタジン)溶液で消毒し、続いて70%アルコールで
消毒します。
6. 滅菌手袋とガウンを着用し、手術部位に滅菌ドレープを塗布します。歯付き鉗子で背中の皮膚を持ち上げ、粗いはさみを使用して、2〜3cmの背側正中線切開を行います。
7. 鈍いハサミまたはプローブを使用して、下にある真皮を体壁から分離します(両側移植の場合は切開の両側、片側移植の場合は片側)。
8. マウスを横方向に再配置し、筋肉壁を通して腎臓プロファイルを見て腎臓の位置を特定します。親指と人差し指で腹部に手動で優しく圧力をかけると、内臓の視覚化に役立つ場合があります。
9. 細い虹彩ハサミを使用し、主要な血管や脊髄神経を避けながら、背骨と平行に体壁に1cmの切開を行います。この切開部を1.5〜2.0cm(腎臓の長軸より少し長い)に広げ、最初の切開部に入れた後、はさみを広く開きます。
10. 人差し指と親指を使用して、腎臓の両側の筋肉壁の外側に穏やかな圧力を加えることにより、腎臓を外部にします。皮膚の端を体壁に載せる外側の腎臓の下に押し込みます。腎臓が外部化されている間、滅菌生理食塩水を適用して腎カプセルの水分補給を維持します。.
11. 細い#5鉗子を使用して、腎臓の実質から腎臓嚢をそっと持ち上げ、細かいメスでカプセルに2〜4mmの切開を行います。切開部のサイズは移植片のサイズによって決まりますが、カプセルの完全性を維持するために最小限に抑える必要があります。
12. 薄く引き出され、腎臓の表面に接するカプセルの下の丸みを帯びた閉じた端で磨かれたガラスパスツールピペットを操作します。移植片用の小さなカプセルポケットをそっと開け、腎臓の実質を傷つけないように細心の注意を払います。
13. 腎臓嚢の切断端を細い鉗子で持ち上げ、ファイヤーポリッシュガラスピペットを使用して移植片をカプセルの下のポケットに挿入します。いくつかの移植片を腎臓嚢の下に配置して、腎臓表面に等間隔に配置することができます。
14. 移植の過程でカプセルが脱水状態になった場合は、滅菌生理食塩水を適用して湿らせてください。
15. 移植が完了したら、筋肉壁の切開部の側面をそっと持ち上げて、腎臓を体腔に戻します。移植片がカプセルの下から滑り出さないことを確認します。
16. 1本の縫合糸(4-0、FS-2ビクリル縫合糸)で筋肉壁を閉じます。外科的処置は、マウスの位置を変えることにより、反対側の腎臓で繰り返すことができます。
17. 歯付き鉗子を使用して、皮膚の切開部の端を合わせ、2〜3個の外科的創傷クリップを適用して切開を閉じます。鎮痛剤を投与し(皮下注射を使用して5-10 mg / kgのカルプロフェンを使用します)、マウスを回復ケージの横臥位に置きます。ランプや加熱パッドからの熱で体温を維持してください。マウスが完全に回復するのを観察し、15分以内に回復するはずです。
18. マウスは、術後の痛み、出血、および/またはその他の合併症の兆候がないか、次の24時間観察する必要があります。.感染の兆候がないか、外科的切開部を定期的に検査します。
19. 手術後7〜14日後に、外科的創傷クリップ除去装置で創傷クリップを取り外します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
滅菌手術用ガウン	中西部の獣医供給	350.79866.2
サージカルマスク	中西部の獣医供給	350.50111.2
滅菌手袋	キンバリー・クラーク	55092
反射傷クリッパー	F.S.T.	12031年09月	傷口付きクリップサイズに対応
ビクリル縫合糸	中西部の獣医供給	295-92100.2	4-0、FS-2、吸収性
ストレートシャープ/ブラントハサミ	ファインサイエンティフィックツール(F.S.T.)	14054から13
グレーフ鉗子(鋸歯状、歯付き、湾曲)	F.S.T.	11055から10
イソフルラン気化器	スーパ麻酔 Innov	VAP3000
インダクションチャンバー	スーパ麻酔 Innov	RES644
ガラスパスツールピペット	フィッシャーサイエンティフィック	S67050	5インチの長さ
グレーフ鉗子(鋸歯状、湾曲)	F.S.T.	11052から10
グレーフ鉗子(鋸歯状、ストレート)	F.S.T.	11050から10
ベタジン	ウェブスター獣医	07-836-3379
滅菌生理食塩水	中西部の獣医供給	193.74504.3	NaCl 0.9%、注射可能
コットンチップアプリケーター	中西部の獣医供給	001.06220.2
巻線クリップ	ブレインツリー・サイエンティフィック	ACSのCS	7mmまたは9mmのクリップを使用できます
イソフルラン	中西部の獣医供給	193.33161.3
解剖顕微鏡	ライカ	L2
小さなマウスのノーズコーン	スーパ麻酔 Innov	ACC526
酸素流量計	スーパ麻酔 Innov	オキシ660
Wold Clip Remover(ウォルドクリップリムーバー)	F.S.T.	12033-00	万国

(代表)