組織切片の脱パラフィンと再水和:FFPE組織スライドからパラフィンワックスを除去するための2段階の手順とそれに続く組織再水和

要約

出典:Sugimoto, K. et al.消化器がんにおけるDNAメチル化のゲノムワイド解析。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオでは、消化管腫瘍組織から得られたFFPEまたはホルマリン固定パラフィン包埋切片の処理を実演します。脱パラフィンと再水和のステップにより、その後の分析アプリケーションのための組織標本の処理が可能になります。

プロトコル

人間の福祉に関する制度的、国内的、国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査されています。

1. スライドの洗浄

1. 未染色のホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)切片10 μmを調製します。
2. スライドをガラススライドホルダーに置きます:ティッシュが最小限で、より多くのスライドが必要な場合を除き、約3〜5個の最大の断面スライドを使用します。
3. スライドホルダーにキシレンを充填し、スライド上のすべての組織が水没していることを確認します。15分間座っておきます。
4. 15分後、スライドが落ちないように、スライドをピペットチップで保持した状態でキシレンを注ぎます。
5. 以前と同じレベルまでキシレンをもっと注ぎます。さらに15分間座ってください。
6. 15分後、再びキシレンを注ぎます。
7. スライドホルダーに100%エタノール(EtOH)を充填し、スライド上のすべての組織が完全に水没していることを確認します。3分間座っておきます。
8. スライドを慎重に保持しながらEtOHを注ぎます。より多くのEtOHで同じレベルに詰め替えます。2分間座っておきます。
9. EtOHを再度注ぎ、スライドを取り外します。清潔なペーパータオルの上に上向きにして慎重に置き、乾かします。10分間座っておきます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
キシレン	シグマ・アルドリッチ	214736
100%エタノール	シグマ・アルドリッチ	24194