FFPE Tumor Tissue Macrodissection:未染色標本から特定の腫瘍組織を取得する技術

要約

出典:Sugimoto, K. et al.消化器がんにおけるDNAメチル化のゲノムワイド解析。J. Vis. Exp.(2020年)

このビデオでは、未染色の組織標本からがん組織を手動でマクロ解剖して特定のがん組織を得る方法を説明しています。組織切片をさらに処理して、消化器がんのゲノムワイド研究のためのDNAを取得できます。

プロトコル

1. スライドのスクレイピング

1. 650 mLのジエチルピロカーボネート(DEPC)処理水、100 mLのエチレンジアミン四酢酸(EDTA)、50 mLの塩酸トリス(Tris-HCL)2 M pH 8.8、および200 mLの10%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)で消化/溶解バッファーを調製します(材料の表を参照)。
2. 1.5 mLのシングルユースポリプロピレンチューブに80 μLの消化/溶解バッファーを満たします(「材料の表」を参照)。
3. きれいなピペットチップをバッファーに入れます。
4. 適切なH&E染色切片に従って、マクロ解剖に最も適した腫瘍領域のがん組織を特定します。
5. マークされたH&E染色切片に基づいて癌組織をマクロ解剖します。
   1. 清潔なカミソリの刃を取り、スライドからがん組織をそっとこすり落とし、作業がしやすいように一体に保つようにします。
   2. バッファーを含む使い捨てポリプロピレンチューブからピペットチップを取り出し、それを使用して廃棄された組織をバッファーバイアルに移します(材料の表を参照)
      注:濡れた先端が組織を引き付ける必要があるため、転写が容易になります。
6. 残りのスライドで手順1.5を繰り返します。
7. すべての組織が使い捨てポリプロピレンチューブに入ったら、ティッシュが完全に水没し、チューブの壁に付着していないことを確認するためにチップを使用します。
8. 20 μLのサブチリシン関連セリンプロテアーゼをバイアルに加え、静かにフリックして混合します(材料の表を参照)。
9. バイアルを55°Cのヒートブロックに少なくとも4時間または一晩置きます。2時間後に少し渦を巻くようにしてください。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
10%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)	品質、生物学的	351-032-721 EA
DEPC処理水	品質、生物学的	〒351-068-131
エチレンジアミン四酢酸(EDTA)	コーニング	46-034-CL
トリス塩酸塩(トリス-HCL)2 M pH 8.8	品質、生物学的	〒351-092-101
プロテイナーゼK	ニューイングランドバイオラボ	P8107S型
使い捨てポリプロピレン(Eppendorf)チューブ	エッペンドルフ	24533495