スライド切片の弾性繊維染色:胃がん転移の観察技術

要約

出典: Lei, G. et al. Elastic Staining on Paraffin-embendedSlides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue. J. Vis. Exp.(2019年)

このビデオでは、消化管腫瘍組織から得られた切片の弾性染色を実演します。この染色手順により、細い弾性線維の可視化が可能になり、弾性ラミナを超えた腫瘍細胞の浸潤を特定するのに役立ちます。

プロトコル

人間の福祉に関する制度的、国内的、国際的なガイドラインに準拠して実施され、地元の施設審査委員会によって審査されています。

>1. 染色

1. 染色を進める前に、スライド上のティッシュペーパーの周りの余分な溶液を拭き取ってください。
2. スライドを室温および室温湿度の条件に置き、染色プロセス全体を通じてスライド上の組織が乾燥しないようにします。
3. 過マンガン酸カリウムを数滴で5分間スライドを酸化し、過マンガン酸カリウムの量が各スライドの組織切片を覆うのに十分であることを確認します。
4. 酸化したスライドをCoplinジャー内の蒸留水ですすいで、2〜3回交換します。組織の青い色を観察します。
5. 次に、シュウ酸を数滴加えて5分間これらのスライドを漂白します。
6. 蒸留水で満たされたCoplinジャーにスライドを浸して、スライドをすすぎます。すすぎを2x-3x実行します。
7. 次に、これらのスライドを95%アルコールで短時間洗浄し、スライドをエラスチン溶液(5 g / L)に8〜24時間浸します
   手記：エラスチン溶液は揮発性であり、その染色時間は比較的長いため、弾性染色されたスライドを、シーリングキャップ付きの透明なガラス瓶などの密閉容器に浸すのが最善です。容器の容量とエラスチン溶液の容量は、すべてのスライドを完全に浸漬できる限り、浸漬スライドの数によって異なります。
8. これらのスライドを95%エタノールに直接1〜2分間浸して、各組織切片をよく区別します
   手記：分化とは、組織切片の電荷の変化を指し、これにより組織に吸収された余分な汚れが取り除かれ、色がより鮮明になります。エラスチン溶液の染色後は、分化の困難を避けるために、サンプルを蒸留水で洗浄しないでください。必要に応じて、青黒の弾性繊維の汚れや灰色の背景がないか、顕微鏡で確認します。その後のVan Giesonの対比染色も弾性染色をいくらか抽出する可能性があるため、組織をわずかに分化させることをお勧めします。
9. 分化後、これらのスライドを蒸留水で完全にすすいでください。
10. Van Giesonの溶液でスライドを1分間対比染色します.
    手記：Van Gieson溶液の容量は、各スライド上の組織切片を完全に浸すのに十分な量である必要があります。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Elastin-Van Gieson 染色キット	バソ	BA4083B	弾性繊維、コラーゲン繊維、筋繊維の染色に使用
エタノール	LMAIバイオ	LM64-17-5	100パーセント