継代培養および輸送のためのスフェロイドの分割:小腸神経内分泌腫瘍からのスフェロイドの増殖および移植の手順

要約

出典:Ear, P. H. et al. Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids. J. Vis. Exp. (2019年)

このビデオは、小腸神経内分泌腫瘍細胞から開発されたスフェロイドを分割して増殖させる戦略を示しています。これらのスフェロイドは小腸神経内分泌腫瘍マーカーを有しており、増殖させてさらに抗がん剤の試験に使用することができます。

プロトコル

1. SBNETスフェロイドの分割

>注:これは、拡張と他の研究者と共有するために行われます。

1. P1000ピペットを使用してECMを機械的に切断し、SBNETスフェロイドでECMを滅菌1.5mLチューブに吸引します。
2. 1,000 x g、4°Cで遠心分離し、すべての上清を取り除き、チューブを氷の上に置きます。
3. 新しいECMの2〜4倍の容量をペレットに追加します。新しいECMを古いECMおよびSBNETスフェロイドとピペッティングで10回上下させて混合し、気泡が入らないようにします。
4. ECMとSBNETのスフェロイド混合物の5〜20μLを新しいプレートに移し、ECMを固化させます。
5. 新しいSBNET培地で覆い、インキュベーターに移します。回復率は約95%から100%です。
6. SBNETスフェロイドを別の研究室に輸送する場合は、新しいECMを搭載したSBNETスフェロイドをT25フラスコに移し、ECMを固化させます。
7. T25フラスコにSBNETスフェロイドメディウムを入れ、キャップをしっかりとねじ込み、出荷パッケージを準備します。
8. SBNETスフェロイド培養物を受け取ったら、培養液を取り出し、手順1.1〜1.5を実行してSBNETスフェロイドを培養に戻します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
DMEM	ギブコ	11965-092	組織調製用培地
DMEM/F-12	ギブコ	〒11320-033	オルガノイド培養用培地
FBSの	ギブコ	16000044	培地用試薬
グルタミン	ギブコ	A2916801	培地用試薬
インスリン	シグマ	I0516	培地用試薬
マトリゲル	コーニング	356235	埋め込みとアンカーするマトリックス オルガノイド
ニコチンアミド	シグマ	72340	培地用試薬
ペン/連鎖球菌	ギブコ	15140-122	培地用試薬