出典: Jung, M. K. et al. 透過型電子顕微鏡によるエクソソームの試料調製とイメージング. J. Vis. Exp.(2018年)
このビデオでは、埋め込まれたエクソソームの薄い切片を準備する技術について説明しています。これらの切片は、透過型電子顕微鏡(TEM)を使用してさらに染色および画像化し、エキソソームの構造的特徴を研究することができます。
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方法論記事
埋め込まれたエクソソームの切片化、染色、およびTEMイメージング:TEMを使用してエクソソームの構造的特徴を視覚化するためのプロトコル
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2023年4月30日
この記事について
要約
プロトコル
1. エクソソームのセクショニング
- 精製したエキソソームサンプル(HCT116細胞の培養上清から得られたもの)を純粋な低粘度包埋混合物に包埋することにより、エキソソームブロックを調製します。
- 厚さ60 nmのエキソソームブロックを超ミクロトームで切片 化します。
- 2%酢酸ウラニルで20分間、クエン酸鉛で10分間ダブル染色します.
レイノルズ鉛溶液の場合は、1.33 gの硝酸鉛と1.76 gのクエン酸ナトリウムを合計50 mLの蒸留水に加えます。. - 80kVの透過型電子顕微鏡でグリッドを観察します。
- 「Acquire」をクリックし、CCDカメラシステムの「File」と「Save as」を80 kVの電子顕微鏡でクリックします。露光時間の自動設定に従ってください。
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開示事項
利益相反は宣言されていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ウルトラミクロトーム | ライカ | UCTの | |
| 酢酸ウラニル | EMSの | 22400 | 危険な化学物質 |
| クエン酸鉛 | EMSの | 17900 | |
| 透過型電子顕微鏡 | 日立 | H7600 (英語版) | |
| ニッケルグリッド | EMSの | G200-NI | |
| 銅グリッド | EMSの | G200-CU | |
| 透過型電子顕微鏡 | 日本電子 | JEM2200FS |
