埋め込まれたエクソソームの切片化、染色、およびTEMイメージング:TEMを使用してエクソソームの構造的特徴を視覚化するためのプロトコル

Abstract

出典: Jung, M. K. et al. 透過型電子顕微鏡によるエクソソームの試料調製とイメージング. J. Vis. Exp.(2018年)

このビデオでは、埋め込まれたエクソソームの薄い切片を準備する技術について説明しています。これらの切片は、透過型電子顕微鏡(TEM)を使用してさらに染色および画像化し、エキソソームの構造的特徴を研究することができます。

Protocol

1. エクソソームのセクショニング

1. 精製したエキソソームサンプル(HCT116細胞の培養上清から得られたもの)を純粋な低粘度包埋混合物に包埋することにより、エキソソームブロックを調製します。
2. 厚さ60 nmのエキソソームブロックを超ミクロトームで切片
化します。
3. 2%酢酸ウラニルで20分間、クエン酸鉛で10分間ダブル染色します.
   レイノルズ鉛溶液の場合は、1.33 gの硝酸鉛と1.76 gのクエン酸ナトリウムを合計50 mLの蒸留水に加えます。.
4. 80kVの透過型電子顕微鏡でグリッドを観察します。
5. 「Acquire」をクリックし、CCDカメラシステムの「File」と「Save as」を80 kVの電子顕微鏡でクリックします。露光時間の自動設定に従ってください。

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
ウルトラミクロトーム	ライカ	UCTの
酢酸ウラニル	EMSの	22400	危険な化学物質
クエン酸鉛	EMSの	17900
透過型電子顕微鏡	日立	H7600 (英語版)
ニッケルグリッド	EMSの	G200-NI
銅グリッド	EMSの	G200-CU
透過型電子顕微鏡	日本電子	JEM2200FS