Gold Immunostaining of Exosomal Sections: A Technique to Visualize Diagnostic Markers in Exosomal Lumen

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Research Article

エキソソーム切片の金免疫染色:エキソソーム内腔の診断マーカーを可視化する技術

July 8, 2025

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このビデオでは、極薄エクソソーム切片の内腔領域に局在するバイオマーカーの金免疫染色を実演しています。この技術により、罹患細胞が分泌するエクソソーム内の標的分子を可視化することで、疾患の早期診断が可能になります。

1. エクソソーム切片の免疫染色とイメージング

エクソソームブロックの60 nmの極薄切片をウルトラミクロトームで作製し、ニッケルグリッド上に集めます。
0.02 Mグリシンの50 μL滴でグリッドを10分間インキュベートし、遊離アルデヒド基をクエンチします。
100 μLのDWを各3回、10分間すすぎ、1% BSAを含むPBSで室温で1時間インキュベートします。
50-100 μL滴の抗KRS抗体 (0.1% BSAを含むPBSに1:100) でグリッドを1時間インキュベートします (必要に応じて、このステップを4°Cで一晩実施する必要があります)。
0.1% BSAを含むPBSを5滴(50 μL)でグリッドをそれぞれ10分間洗浄します。
グリッドを二次抗体の滴下に1時間移します(0.1%BSAを含むPBS中の10 nm金粒子(1:100)に結合した抗ウサギIgG)。
0.1% BSAを含むPBSを10分ごとに5滴(50 μL)でグリッドを洗浄します。
暗所条件下で2%酢酸ウラニルと20分間、レイノルズクエン酸鉛とそれぞれ10分間ダブル染色します。
80 kVの透過型電子顕微鏡でグリッドを観察します。
「Acquire」をクリックし、次に「File」をクリックし、80 kVのTEMの下のCCDカメラシステムで「Save as」をクリックします。露光時間は自動設定に従いました。

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の型の年

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