精製エクソソームのネガティブ染色:透過型電子顕微鏡によるエクソソーム形態の可視化法

要約

出典:Jung, M. K. et al. 透過型電子顕微鏡によるエクソソームのサンプル調製とイメージング。 J. Vis. Exp. (2018)

この動画では、精製したエクソソームのネガティブ染色の手順を説明しています。陰性に染色されたエクソソームは、透過型電子顕微鏡を用いて画像化されます。この手法は、エクソソームの形態を視覚化するのに役立ちます。

プロトコル

1. ネガティブ染色

1. 薄いフォームバー/カーボンフィルムでコーティングされた200メッシュの銅EMグリッドをグローディスチャージャーで1分間グロー放電します。
2. 精製したエキソソームを1 mLの2%パラホルムアルデヒド(PFA)で5分間固定します
   注:パラホルムアルデヒドフュームは有毒です。すべての作業は、換気されたドラフトで行う必要があります。
3. 5-7 μLのエキソソーム懸濁液をグリッドにロードし、1分間インキュベートします。エクソソームの濃度が高すぎる場合は、濃度を2分の1から5分の1に希釈してください。
4. すぐに、ろ過した 1% 酢酸ウラニル (UA) 溶液を ~20 滴滴 EM グリッドの表面にシリンジで染色します。
5. グリッド上の余分なUA溶液を、グリッドの端を濾紙で接触させて取り除きます。
6. グリッドを一滴の水ですばやくすすぎます。このステップにより、余分な染色液が除去されます。
7. グリッドをピンセットで持ってテーブルの上に置き、グリッドの一部を培養皿で覆い、室温で10分間乾燥させます。
8. グリッドをEMグリッドボックスに保管し、80kVのTEMによる将来の観測に備えます。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
酢酸ウラニル	EMSの	22400	危険な化学物質
透過型電子顕微鏡	日本電子	JEM2200FS
グローディスチャージャー	日本電子	JFC1100E
パラホルムアルデヒド	EMSの	19210
Formvarカーボンコーティング銅 < BR /> グリッド(200メッシュ)	EMSの	FCF200-CU
Formvarカーボンコーティングニッケル グリッド(200メッシュ)	EMSの	FCF200-NI

年 シリーズ