マウス垂直スリーブ胃切除術:実験マウスモデルにおける胃のサイズを縮小するための外科的処置

要約

出典: Garibay, D., Cummings, B. P. A Mouse Model of Vertical Sleeve Gastrectomy. J. Vis. Exp. (2017)

このビデオでは、実験マウスモデルで垂直スリーブ胃切除術を行っています。この手順は、胃の大きな湾曲に沿って胃のかなりの部分を取り除くのに役立ちます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 垂直スリーブ胃切除術と偽の手術

1. 手術当日は、マウスの体重を量り、ベースライン体重の測定値を取得します。
2. 手術室には麻酔システム、温水浴、加熱パッドを装備しています。ウォーターバスを37°Cに設定し、それを使用して灌漑用の0.9%生理食塩水を温めます。70%エタノールで手術野を洗浄し、無菌技術を使用してオートクレーブ滅菌された手術パックとツールを開きます.
   手記：ヒーティングパッドは、手術中や麻酔からの回復中に動物を暖かく保つために使用されます。
3. 誘導チャンバーを使用して、マウスに5%イソフルランと1L/minのO₂流量で麻酔をかけます。つま先をつまんでマウスが適切な麻酔面にあることを確認します。マウスを1〜3%のイソフルランと0.6 L / minのO₂流量で維持します。
4. マウスに麻酔をかけたら、手術中に目を湿らせておくために、目の軟膏(材料の表を参照)を目に置きます。このとき、メロキシカム(皮下投与で2 mg / kg)などの鎮痛剤も投与します。.臍から腋窩まで髪をクリップし、皮膚を優しく押さえて緊張を与えます。
   1. マウスの皮膚は薄くてデリケートなため、毛を刈る際に皮膚を傷つけないように注意してください。ポビドンヨードとアルコールで肌をきれいにします。
   2. 滅菌手袋を着用し、滅菌された手術フィールドと器具を準備します。滅菌技術を使用して残りの手順を実行します。マウスの両側に滅菌外科用ドレープを配置して、滅菌術野を準備します。オートクレーブ処理した錫箔を使用して、マウス用の外科用ドレープを作成します。
   3. 錫箔に小さな穴を開けて、マウスの腹部にアクセスできるようにします。
5. 虹彩ハサミを使用して、腹部中央部(臍)から剣状軟骨のレベルまで皮膚を切開します。linea albaを特定し、虹彩はさみを使用してlinea albaに沿って体壁を切り取ります。CTAを使用して、胃を腹部からゆっくりと持ち上げてから、胃の大きな湾曲から大網を鈍く解剖します。
6. 胃の眼底と脾臓の間を走る短い胃動脈を、7-0モノフィラメント吸収性縫合糸を使用して2つの結紮糸を配置することにより結紮します。スプリングハサミを使用して、2つの結紮糸の間をカットします。動脈が切断されたら、腹腔から胃を完全に外側に押し出します。ガーゼを胃の下に置き、生理食塩水で濡らして組織を湿らせます。
7. VSG 手順では、胃動脈と静脈の顕著な枝を 7-0 モノフィラメント吸収性縫合糸で結紮し、結び目ごとに 3 回投げるテーパー針を使用します。合字を、意図した交差線のすぐ下(つまり、胃の曲率の小さい方)に配置します。
   手記：意図された切断線は、胃の心臓のノッチの~2 mm上(胃のより大きな湾曲に向かって)から始まり、マーゴピルカトゥスの少なくとも2 mm下にあり、膵臓の右葉の近位端まで伸びています。通常、胃壁ごとに結紮が必要な血管が4つあります。ただし、これはマウスによって異なる場合があります。
   1. 胃切除術中の胃内容物のこぼれを防ぐために、テーパー針付きの6-0モノフィラメント吸収性縫合糸を使用して、意図した切断線のすぐ下に両方の胃壁を通る単純な連続縫合糸を配置します。縫合線は、外科医の食道の右側とマーゴピルカトゥスの下から始まり、膵臓のすぐ上で終わります。
   2. 先端が細い止血剤を縫合糸ラインの上に置き、スプリングハサミを使用して縫合線と止血剤の間を切断します。切除した胃組織を滅菌術野から取り出します。CTAを使用して、胃から血液と消化物をきれいにします。
   3. 6-0モノフィラメント吸収性縫合糸とテーパー針を用いた単純な不連続パターンを用いた胃壁の同位補強
      手記： 単純な不連続縫合パターンは、単純な連続縫合パターンよりも確実に閉じることができるため、推奨されます。
   4. 組織を湿らせて清潔に保つために、手順全体を通して胃の残骸を生理食塩水で洗い流します。20mLのシリンジに取り付けた20Gの強制針を使用して、生理食塩水で胃洗浄を行います。このサイズを使用して、過度の圧力による胃組織の損傷や、通常の先のとがった針の使用による偶発的な胃組織の損傷のリスクなしに、適切な圧力が供給されるようにします。
   5. 最低 20 ノットを使用して胃をしっかりと閉じます。食道側はアクセスが難しく、裂開の場所であることが多いため、食道側に沿った閉鎖に注意してください。
   6. CTAで胃をそっと押して、漏れがないことを確認します。漏れが特定された場合は、漏れのある領域に追加の単純な不連続な結び目を配置してから、再度リークテストを行います。漏れが検出されなくなるまでリークテスト
   。
   7. 少なくとも60 mLの生理食塩水を使用して胃の最終的な徹底的な洗浄を行い、感染性の粒子状物質が残っていないことを確認します。
8. CTAを使用して胃を肝臓の下の腹腔に戻します。腹腔の背側に沿ってCTAを配置して、余分な水分をすべて吸収します。鈍い18G針を使用して、抗生物質(0.5 mL LRS +/- 20 mg / kgエンロフロキサシン)の有無にかかわらず、授乳リンゲル液(LRS)を閉鎖直前に腹腔内に直接注入します
   手記：これにより、手術中に経験した体液の損失が補われ、手術部位に抗生物質を直接塗布して回復を支援する方法が提供されます。
9. 6-0モノフィラメント吸収性縫合糸とテーパー針を単純な不連続パターンで使用して、腹筋層を閉じます。次に、6-0モノフィラメント吸収性縫合糸で皮膚層を単純な連続パターンで閉じます。
10. 皮膚に組織接着剤を塗布し、縫合糸ライン上に皮膚を折りたたんで縫合糸を埋め、マウスが術後に創傷閉鎖を中断しないようにします。
11. イソフルランの電源を切り、マウスを加熱パッドで10〜15分間回復させてから、ホームケージに戻します。動物が意識を取り戻し、動くことができるようになるまで、動物を放置しないでください。
12. 手術から完全に回復するまで、動物を一人で飼育してください.
    手記：研究全体を通して正確な食物摂取量測定が得られる場合、マウスは研究全体を通して単独で飼育し続ける必要があります。家庭用ケージの寝具を食べることで異物が詰まる恐れがあります。動物は、豊かさを提供するための巣材を除いて、寝具のないケージに収容する必要があります(材料の表を参照)。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
6-0 縫合糸	エチコン	Z432	モノフィラメント吸収性/テーパー
7-0 縫合糸	コヴィディエン	8866127から01	モノフィラメント吸収性/テーパー
綿棒	フィッシャーブランド	23-400-118	小さい
綿棒	フィッシャーブランド	233-400-101	大きい
ホイル	諸
手術用ドレープ	諸
0.9%生理食塩水	諸
マイクロニードルドライバー	ファインサイエンスツール	12075-14
春はさみ	ファインサイエンスツール	15396から00
アルコール	諸
目の軟膏	Paralubeの®獣医軟膏	17033-211-38
メロキシカム(メタカム)	ベーリンガーインゲルハイム	141-213	5 mg / ml
細い先端の止血剤	ファインサイエンスツール	13021-12
20 mLシリンジ	諸
エンロフロキサシン	バイトリル	08713254から186599	22.7 mg / ml

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