後肢骨格筋抽出術:マウスモデルから後肢骨格筋を切除する手順

要約

出典:Bonetto, A. et al.癌性悪液質の研究のためのモデルとしての結腸-26癌腫瘍担持マウス。J. Vis. Exp.(2016年)

この動画では、マウスモデルから後肢骨格筋を切除する手順を説明します。切除された筋肉は、さらなる下流の分析まで低温で保存することができます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. 組織および臓器の切除

>注:生化学的または分子生物学的アッセイで組織を使用する場合は、各臓器と組織の重量を量り、フラグメントをすぐに事前に標識したクライオチューブに入れることを計画してください。液体窒素で凍結し、-80°Cで保存します。

1. 組織サンプルが毛皮で汚染されるのを防ぐために、全身に70%エタノールをスプレーします。
2. マウスを解剖ベッドに仰臥位で置き、足を高いビュレットクランプに取り付けて手足を垂直に伸ばします。
3. デュモン鉗子で下肢の皮膚をつかみ、湾曲した細いハサミで皮膚と筋膜をやさしく取り除き、下肢の下層の筋肉腹を露出させます。
4. 後下肢の腓腹筋は、後大腿骨の外側顆と内側顆での起点と、踵骨腱を介した踵骨への挿入によって識別します。
   1. 腓腹筋腱の切断に進みます。デュモン鉗子で腓腹筋の遠位端をつかみ、筋肉の腹をその起源に向かって引っ張ります。.はさみを使用して、大腿骨にできるだけ近い起点で筋肉を切ります。筋肉を皿に入れます。すぐに計量し、液体窒素のチューブで凍結します.
      手記：腓腹筋と一緒にヒラメ筋を切除しないように注意してください。その場合は、ヒラメ筋を鉗子でそっと引っ張って慎重に取り除きます。
5. 脛骨の前外側表面での起点と、遠位腱を介した内側楔状筋への挿入から、前脛骨筋を特定して切除します。
   1. レバレッジをかけるためには、人差し指と親指で指をつかんで足をホールドします。デュモン鉗子の先端を脛骨の表在遠位腱のすぐ下に挿入し、鈍い側を使用して脛骨筋腹を下の結合組織から切り離すことができるように鉗子を動かします。
   2. 細く湾曲したハサミで遠位腱を切開し、起点の筋肉をできるだけ脛骨に近づけて切ります。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
CD2F1マウス	ハーラン	60
麻酔器具	EZ-麻酔	EZ-7000
10月	ティッシュテック	4583
クライオスタット	ライカ	CM1850
コルクディスク	電子顕微鏡科学	63305
マイクロテナー	BDの	365873
スーパーフロストとスライドガラス	VWRの	48311-703
ストレプトマイシン-ペニシリン	セルグロ	30-002-CIの

名 名 の