マウス腸の全埋込準備:単純な腸切開装置を使用して全埋込を準備

要約

出典:米田氏ら A simple device to Rapidly Prepare Whole Mounts of the Mouse Intestine. J. Vis. Exp. (2015)

このビデオでは、簡単な腸切開装置を使用してマウス腸の全マウント準備を実演します。得られたマウントは、高品質で優れたものであり、組織学的分析に使用できます。

プロトコル

動物モデルを含むすべての手順は、地元の施設動物管理委員会とJoVE獣医審査委員会によって審査されています。

1. デバイス

1. この原稿で説明されているように、高密度アセチル樹脂の固体ブロックからデバイスのベースの主要部分を機械加工します。両端に3 mmの高架ストリップを作成し、これらの2.5 mmの溝から部品を加工してロッドを取ります(図1および図2を参照)。
2. ロッドは、端が丸みを帯びた直径2.4mmのステンレス鋼から作られます。
手記：フタのメインフレームはジュラルミン板から削り出されました。

>2. デバイスの使用

1. はさみと手袋をはめた指を使用して、腹腔から小腸と結腸を解剖します。湾曲した鉗子で腸間膜を保持し、腸からそっと引き離して腸間膜を切除します。
2. 10 mLまたは20 mLのルアーフィッティングプラスチックシリンジに収まるように幅の広い端で切り詰められたギルソンタイプのピペットチップを使用して、冷たいリン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.4)で腸をすすぎます。
3. 小腸(SB)をペーパータオルの上に広げ、ハサミを使用して長さが3つの等しいセクション(近位、中、遠位– SB1、SB2、およびSB3)に分割されます。盲腸を取り除き、結腸をレイアウトします。
4. ハサミで腸の部分に非常に小さな切り込みを何枚か入れて液体を逃がし、腸の上にペーパータオルを置き、準備物に指をそっと走らせて液体を絞り出し、乾かします。
5. セクションを持ち上げ、以前にリン酸緩衝生理食塩水のビーカーに浸して濡らしたステンレス鋼の棒を挿入します.
   手記：腸は、必要に応じて反転させることができます(裏返しにすることができます)。
6. デバイスのベースに収まるようにサイズにカットされたカードまたは濾紙にラベルを付けます。鉛筆は、事実上すべてのソリューションの影響を受けないため、最適です。剖検日、実験コード、動物識別番号が提案されます。
7. カードまたは濾紙をデバイスのベースに置きます。ロッドと腸をデバイスのベースのスロットに挿入します。セグメントの近位端が標準化された方法で配置されていることを確認します。近位端はカードラベルの近くにある必要があります。
8. デバイスの上部をベースの上に置きます。角度のついたバーを使用してメスの刃をガイドし、切片を縦方向に切断します。
   手記：ティッシュを指で優しく丁寧に保持して、ナイフで動かないようにすると効果的です。
9. デバイスの上部を取り外します。濾紙とティッシュペーパー(ロッドについたまま)を慎重に取り除きます
   手記：濾紙の下に置かれた硬いカードは、持ち上げるのを助けます。
10. セグメントを少し濡らします(手袋をはめた指先をPBSに浸します)。ロッドを左右に転がして腸を開き、平らに広げます。その後、ティッシュが濾紙に付着します。
11. 肉眼的病変の準備を視覚的に調べます。
12. 濾紙に接着した組織を、固定剤が入った浅い浴槽(またはサンドイッチボックス)に移します
    手記：ティッシュが濾紙またはカードに付着した後も、しっかりと付着したままになります。調製物を保存するために、さまざまな固定剤を使用することができます。Carnoyの液体は、最良の細胞増殖方法の理想的な固定である腸細胞増殖の研究に使用することが推奨されます。ただし、他のエンドポイントが必要な場合は、ホルマリンまたは他の多くの固定剤も使用できます。
13. 固定後(通常は3時間)、調製物を70%エタノールに移します。その後、サンプルは必要になるまで保存できます。調製物は、H&Eまたはその他の組織学的染色技術、免疫組織化学、および/またはin situハイブリダイゼーションのための組織学的サンプルの調製に、直視して研究することができ、および/またはin situハイブリダイゼーションに使用することができます
    手記：長時間の固定により、免疫組織化学的反応性および/またはin situハイブリダイゼーション反応性が低下する可能性があります。ポリプロピレン製のサンドイッチボックスは、大量の調剤を保管するのに理想的です。
14. 必要に応じて、さまざまな腸セグメントからの固定組織を「スイスロール」にし、上記のものを含む全範囲の組織学的方法で染色することができます。「スイスロール」を作るには、腸の部分を濾紙から取り出し、カクテルスティックまたはつまようじに巻き付け、昆虫学的ピンで固定し、ワックスを埋め込むために処理します。
15. 必要に応じて、バルク組織をメチレンブルーで染色し、異常な陰窩の病巣を視覚化します。
16. 決まった準備を余暇に採点します。

結果

図 1.元のデバイスの写真。(A) 組み立てられた装置。(B) 装置の上部は、ロッドが所定の位置にあることを示すために取り外されています。

図 2.再設計されたデバイスの写真。(A)蓋のメインフレームはジュラルミン板から機械加工されています。(B)ベース(黒で表示)は高密度アセチル樹脂の固体ブロックでで...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
デルリン	ライアン・プラスチックス、アールズ・バートン、英国		高密度アセタール樹脂類似材料
ジュラルミン板	メタルサプライ株式会社、パークロード、デューキンフィールド。SK16 5LP イギリス		アルミニウムは1909年までさかのぼることができるため、代替サプライヤーが利用可能です
すぐに使用できる完成したデバイス	Goodlad博士に連絡する r.goodlad@imperial.ac.uk		供給の詳細については、r.goodlad@imperial.ac.uk にお問い合わせください

で十分です